白眉蝮蛇新磷脂酶A-%2c2-同源物研究.pdf

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摘 要 长自由鑫稿竣既(Agkistrodonblomhoffii 具有多转生物学活性,是蛋白质结构与功能研究的理想天然蛋白。 SP 本磷究以小自鼠的腹腔注射给药,戈出血致死作为检测搬标,采用Hitrap 75凝胶过滤层析、Source 阳离予交换、Superdex Q阴离子交换层析三步纯化方法, 钛长皇啦自强蝮蛇蛇毒中纯他辛搴经毒索,褥率是3,25%;疑对建立购抗毒素特异性 IgY配基一步索和层析纯化神经毒素,得率可达12.9%,是三步纯化方法的4倍。 该蛋自爱经交羧蒙嚣烯凝获鸯泳(SDS-淞GE)捡溺为~条繁,与凝羧过滤溺定豹 分子量相符,耀单链多肽;质谱检测分子量为13881.85土0.33Da:等电聚焦测定等 电点约为8.56。 逶遗对分蓠自屠暧蛇神经簿素进行的氨蘩酸组成分孝蓐,K.漆氨蒸酸测定,获 质谱指纹图谱分析,缀合cDNA序列测定,确定了该檬素的一级结构,具有典型的 血活性检测、富含』I![I小板血浆的抗凝胤活性检测,大肠杆菌的抑菌实验,结果表明 该蛋囊矮没畜PLA2嚣性、溶巍活蛙、掇蓄活憋,毽其蠢撬凝纛{乍嚣,浓疫褰予0.2 mg/ml时,随物浓度的增加,复钙时间显著延长;氨基酸序列分析和三级结构模拟 水解活性丧失黝1i嗄原因,同时证明抗凝血活性位点与水解活性位点相互独立。 615小鼠腓肠肌f胁J 肌酸激酶(CK)的含量是对照的20倍;注射部位的组织切片观察也表明该蛋白质 说明肝素对该蛋白质的毒性韵挝著的抑制作用。 Gln49一PLA2对K562、Hela和HLF3种细胞株的生长影响,MTT和LDH方法 检测表明该蛋白质有细胞毒性,半数致死量(LDs0)分别是28.6 i.tmol/L、1.3肛mol/L 和0.6 后加入培养的Hela细胞,活细胞数比单加等浓度Gin49一PLA2高396%,说明肝素 对细胞毒性有拮抗作用。 Gin49一PLA2具有神经毒毒性,其LDso为18.2 mg/kg:615小鼠腹腔注射 有抑制作用,说明其镇痛作用可能阿片受体有关。 关键词: 长白山白眉蝮蛇;蛇毒;磷脂酶A2:氨基酸序列:神经毒素;肌肉毒素: 细胞毒素;抗凝血活性 Il ABSTRACT ussurensis,amemberofthe ussurensis Agkistrodonblomhoffii Agkistrodonblomhqffii namedas over Emelianof,Crotalinae Manushi,distribute Viperidae,popular mainly northeast and of China,Korean fromsnake partsRussia.PhospholipaseA2 homologue its and varied other beenused venom,for activity

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