四君子汤防治D—半乳糖所致小鼠脑细胞线粒体损伤机理研究.pdf

中文摘要 l选题想路和研究目的 随着人口老龄化的日益明显，如何延缓衰老，提高年老者的生活质量，已成为医 学界研究的重大课题。近年来，中医药以“肾为先天之本”理论为指导，开展了大量 研究工作，阐明了一些中医药抗衰老的机理。然而，衰老是一个多因素综合作用的复 杂过程，其中脾作为“后天之本”对衰老过程的影响亦不容忽视。 中医学对衰老的认识，早在《黄帝内经》时代就已有概说。《黄帝内经》对于人 进入一定年龄阶段将必然衰老的原因和衰老发生机制，有较为全面的论述。《内经》 提出：“女子七岁，肾气盛，齿更发长。……五七，阳明脉衰，面始焦，发始坠。…… 丈夫八岁，‘肾气实，发长齿更。……八八，则齿发去。肾主水，受五脏六腑之精而藏 之，故五脏盛乃能泻。今五脏皆衰，筋骨懈坠，天癸尽矣，故发鬓自，身体重，形步 不正，而无子耳。”(《素问·上古天真论》) “人生十岁，五脏始定血气已通，其气在 下，故好走。……七十岁，脾气虚，皮肤枯；……百岁，五藏皆虚，神气皆去，形骸 独居而终矣”。 (《灵枢·天年》)等观点，明确认为，衰老将随增龄而必然发生，随 增龄而自发的脏腑气血的生理病理变化为衰老的内在原因。 脾胃虚损与衰老相关的学说源于《内经》，唐、宋、元、明、清诸医家，均对其 有所发展。著名的补土学家李东垣将其重视脾胃的学术思想亦贯入到抗老延年的观点 中，日：“凡有此(脾胃)病者，虽不易变生他疾，己损天年”，并主张“调理脾胃，老 年当先“k《脾胃论》)。李中梓则提出了“先天之本在肾，后天之本在脾”的观点。 张介宾日：脾肾“皆为五脏六腑之本”，“土为万物之源，胃气为养生之本……是以养 生家必以脾胃为先……善养脾胃之道，所以便能致寿”(《景岳全书》)。吴昆日：“诸 脏腑百骸皆受气于脾胃，而后能强，若脾胃一亏，则众体皆无以受气，日见蔽弱矣．” (《医方考》)。龚廷贤日：“凡年老之人，当以养元气，健脾胃为主”(《衰老论)。王 文禄日：“是以养脾者……养生之要也。”(《医先》)等等。总之，脾胃受到了普遍性 的高度重视，并把这一重视脾胃的思想极大地贯入到抗老延年的理论指导和治法方药 之中，并以之与补肾抗衰老相提并论，视之为抗衰老的两大最重要原则。 现代研究表明，健脾法可通过不同环节对抗机体的衰老，其延缓衰老作用值得进 一步探讨。本课题以健脾益气代表方四君子汤为研究手段，观察其对衰老小鼠模型 mtDNA缺失的影响，以期从基因水平探讨脾与衰老的关系，阐明健脾益气法延缓衰老 的分子作用机制。研究结果将丰富中医“脾胃学说”理论的内涵，为延缓衰老提供 新的思路和理论依据，并为开发研制抗衰老新药奠定理论基础。 2研究方法 21小鼠衰老模型的建立 选用2月龄昆明种小鼠随机分为6组：正常对照组，模型对照组，维生素E (59·kg·d’1)组。D一半乳糖亚急性衰老模型，水迷宫测试确定学习记忆障碍模型 成立。 22观测指标 22l小鼠行为学观测一般状况观察及小鼠学习和记忆能力测试，造模前后各进行 一次。 222小鼠脑组织NO和NOS含量的测定硝酸还原酶法测定N0含量；根据标准品吸 光值，计算NOS活性。 ． 22 显色法测定GSH—Px。 224琥珀酸脱氢酶(succinate 225小鼠海马组织线粒体DNA缺失的测定PCR扩增法。 2 26Fura一2／AM双波长荧光法测定小鼠海马钙浓度荧光分光光度计测定。 227透射电镜样品制各及观察透射电镜观察线粒体形态结构改变并摄片。 228脑细胞凋亡的检测方法流式细胞仪检测法。 3实验结果 31一般情况观察 模型组小鼠大多数表现为毛发无光或脱落、精神萎靡、进食减少、行动迟缓、活 动减少：部分小鼠可出现共济失调、自发运动增多或自我嘶咬等症状。药物治疗组小 鼠也可在造模1个月左右表现为与模型组类似的症状，但症状较轻，且这些症状在2 月内逐渐减轻。空白对照组小鼠均未出现上述类似症状。 32 四君子汤对D一半乳糖诱致小鼠学习记忆障碍的改善作用 D一半乳糖处理8周时，模型组小鼠学习和记忆能力明显减弱，表现为学习和记忆 阶段的游完全程时间明显延长，进入盲端的错误次数明显增加，与正常对照组小鼠比 维生素E处理后，明显缩短模型小鼠学习和记忆阶段游完全程时间和减少进入盲端的 错误次数(PO．01，PO．05)。 33四君子汤对D一半乳糖诱致学习记忆障碍小鼠脑组织N0含量和NOS活性的影响 D半乳