中国汉族人群ABO血型分子遗传背景的研究.pdf

中国汉族人群ABO血型分子遗传背景的研究 生化与分子生物学 喻琼 李国富副教授 摘 要 研究目的:我们对中国汉族人群ABO血型及ABO血型中A亚型、B亚型的多态 性进行研究，揭示其分子遗传的基础并研制出相关试剂应用于疑难血型的鉴定。 研究方法:本研究采用PCR-SSP法ABO基因分型试剂盒进行ABO常规基因定 型，血清学确定为凡亚型、PCR-SSP法基因定型为A201或A102基因的20例样 本，对其ABO基因的第6、第7外显子进行DNA直接测序。17例经血清学试 验鉴定为A或B亚表现型的样本，对它们ABO基因的第6外显子、第6内含子、 第7外显子进行PCR扩增，直接测序及克隆测序，结果与A*101的基因序列作 比对，分析其基因结构的差异。并对其中一例Ax亚型、一例Bx亚型的标本进行 家系调查。应用Primer5.0软件设计能够检测中国汉族人群ABO血型常见基因及 A2血型基因的试剂盒。 研究成果 (1)26。个随机的个体，经PCR-SSP方法AB。基因定型试剂盒检测， 检出O1,B,AI01(A467c)和A1021103(A467T)四种等位基因，未检出A2,02 等位基因。(2)采用血清学方法从2452例A或AB型随机捐血者中筛检出的20例 A。亚型样本，经PCR-SSP基因定型，仅 6例为A20101或A201B,而其余14例为 A10201或AI02Ba经DNA直接测序，结果6例证实为A201,13例为A205,1例为 A102,A2等位基因中除1061C缺失外，还存在4670T,1009AG点突变。在1例 A2表型个体中，发现一个新的01等位基因。(3)6例B亚型的样本中，在两例分 别定为BB,的样本中及这个B,家系中，发现一个新的B等位基因。该等位基因 与BIN等位基因相比，存在nt695位DC(Leu232Pro)。其余样本的单倍体均为 野生型。11个A亚型中2例A3型为野生型等位基因;1例Aao,型的A基因为少见 的有 1061C缺失的A201等位基因:6例Ax亚型个体，1例发现为ABO*B(A)02 等位基因，1例为新突变T767C(Ile256The)的Ax新基因，1例为新突变G803C (Gly268Ala)的A新基因，1例为新突变A640G(Met214Val)的ABO*B(A)新 等位基因，1例为新突变 T641C(Met214The)*B(A)新等位基因，1例为新突变 G543T(同义)的A新等位基因:2例A.,表型个体与3例AxB表型个体中疑应为A 基因的序列均发现有261G缺失。“)合成了可以检测A101,A102,61,01四种 常见基因及包括A201,A202,A203,A204,A205、A206六种A2等位基因的试 剂盒，并己应用于临床疑难血型的鉴定中. 最终结论研究的结果表明中国汉族人群A2基因呈现多样性并存在自身特点，各 A2等位基因的频率及分布与其它人群的资料存在差异，中国汉族人群AZ亚型中以 A205等位基因(467T,1009G)为主。经对中国汉族人17例ABO亚型个体的基因 结构分析，发现了6个新等位基因，其余为与文献报道相符的野生型。在对3例 AxB表型研究中发现，单倍体序列无A基因，只有261G缺失的0基因，血清学应 定为B(A)型，在临床上有着重要的意义;研究发现ABO基因的第214位、第232 位、256位、268位氨基酸对糖基转移酶活力是至关重要的。 关键词:ABO血型;ABO亚型;DNA测序;ABO新等位基因;糖基转移酶活性 Studyonthemoleculargenetic backgroundofABObIoodgroupinChinese Hanpopulation BiochemistryandMolecularbiology YuQiong LiGuoFu ABSTRACT Object:AfterstudyingthepolymorphismofABObloodgroupandAsubgroup orBsubgroupinChineseHa