MTT法观察肉苁蓉水提液对大鼠成骨细胞增殖影响.pdfVIP

·56· 《中兽医学杂．志．}2008年增刊 作用，其最小阻断浓度为0．0459斗g／mL。 2．5黄芩苷对PRRSV的抑制作用 先将PRRSV接种到单层Marc一145细胞，再加入不同浓度的黄芩苷，作用一定的时间后， 观察细胞生长情况，其结果见表2。 表2黄芩苷对PRRSV的抑制作用 由实验结果可知，黄芩苷对PRRSV有一定的抑制作用，其最小抑制浓度为0，184斗g／mL。 3讨论 黄芩苷的提取方法有很多种，如超声波法、回流法、煎煮法和渗漉法，有相关文献报道，超声 波法操作简单、时间短、重现性好，而且提取率最高一J。由于试验条件的限制，本文所用的方法 是煎煮法中的水提酸沉法，此法较简单，但需三次煎煮，步骤烦琐，耗时长。 试验测得黄芩苷对Marc一145的最大无毒浓度是O．01175mg／mL，即小于此浓度测定黄芩 苷在Marc一145细胞上抗病毒作用才有效，否则视为药物的毒性作用。 本次试验在安全浓度范围内，按不同的给药途径设计了两组实验，第一组先加黄芩苷后接 种病毒，即预防作用；第二组先接种病毒后加黄芩苷，即治疗作用。实验结果表明，黄芩苷对 黄芩苷在体外对PRRSV有明显的阻断和抑制作用。经过分析数据可知，黄芩苷对PRRSV的阻 断浓度比抑制浓度小两个梯度，即抑制作用是阻断作用的4倍，说明黄芩苷能有效的预防PRRS 的发生。近年来，许多专家关于中草药对病毒性疾病的预防和治疗做了很多研究，如王学斌¨。J 等关于板蓝根、黄芪对猪繁殖与呼吸综合征病的体外抑制作用的研究，张光道【l¨等关于黄芩多 糖对猪生殖与呼吸综合征病毒的作用研究，这些都为我们进一步了解黄芩苷的抗病毒作用机理 提供了理论基础。 通过CPE抑制试验测定黄芩苷在体外对PRRSV的体外抑制作用，其结果判定简单、直观。 但是由于时间及试验条件的限制、操作因素的影响，以及不同培养板上的CPE的差异性，从而 导致试验的稳定性及重复性不好，今后还有待于进一步研究和改进。 参考文献：(略) MrIT法观察肉苁蓉水提液对大鼠成骨细胞增殖的影响 邹宇云，韩博。刘钟杰。 (中国农业大学动物医学院，北京，100094) 摘要：为观察肉苁蓉水提液对体外培养的大鼠成骨的增值影响，本试验采用改良酶消化法。以初生24h 中兽医学杂志)2008年增刊 ·57· 一l 分别作用48h、72h和96h后对细胞增殖的影响。结果表明。一定浓度的肉苁蓉水提液对大鼠能显著促进大鼠 成骨细胞的增殖，且与时效相关。 关键词：内苁蓉；成骨细胞；MTr 中医以补肾强骨为原则，组建了许多单方或复方制剂，用于治疗骨关节炎、骨质疏松和骨折 等疾病，目前已经商品化的有补肾健骨汤、抗骨增生片、承载丸、鹿茸苁杞汤、四妙散等，疗效确 实。许多补肾壮阳制剂中的主药均含有肉苁蓉。本试验采用MTr法观察不同浓度的肉苁蓉水 提液，作用不同时间后对细胞增殖的影响。探讨肉苁蓉补肾强骨的细胞学基础，为该药扩大临 床应用提供理论依据。 l材料与方法 1．1动物 新生24h内的SD大鼠。 1．2药物及试剂 1．3仪器 旋转蒸发仪(上海申顺生物科技有限公司)；酶联免疫检测仪(BioRad)。 1．4药液的制备与分组 液，过滤后的药渣再加8倍蒸馏水，煮沸后文火加热25min，过滤，合并两次滤液，混匀，2500r／ 封，4。C保存。l临用前过滤除菌，用DMEM维持培养基(含4％标准胎牛血清)稀释，配制成含生 mg／ ’ mL的6组含药DMEM培养液作为试验组，以不加药物的DMEM维持培养基作为对照组。 1．5成骨细胞的分离培养 取新生24h内的SD大鼠10只(本实验室提供)，颈椎脱臼法处死，75％医用酒精浸泡 血管和结缔组织，按吴培福介绍的方法进行成骨细胞培养…。待培养的细胞汇合后用0．25％ 胰酶消化，按1×104+／rrlL细胞密度接种传代。