以脂多糖诱导昆虫离体细胞产生抗菌肽及其抗菌活性的研究.pdfVIP

中文摘要 抗菌肽是近年来发现的广泛存在于自然界的一类具有抗菌活性的分子，它们在 宿主先天性免疫和适应性免疫中起着重要作用。多数抗菌肽具有分子小、带正电、 两亲性、抗菌谱广等共同特点。在诱导和非诱导的情况下，昆虫能产生各种类型的 抗菌肽。抗菌肽的大量表达是昆虫受外物入侵或受伤后的特异性免疫反应，参与机 体对入侵病原微生物的免疫应答反应，在昆虫的免疫防疫系统中占有重要的地位。 抗菌肽对细菌、真菌、病毒和原虫都具有作用，甚至对癌细胞也具有杀伤作用。由 于离体细胞在分子水平研究基因性质的优越性，越来越多的研究者尝试用离体培养 的昆虫细胞来研究昆虫抗菌肽的诱导和表达。实验已证明用脂多糖、昆布多糖、鞭 毛蛋白以及热灭活的大肠杆菌等物质诱导果蝇、棕尾别麻蝇、墨西哥棉铃象j白纹 伊蚊、粉纹夜蛾等昆虫的细胞系表达了抗菌肽。 本实验尝试用10。3mg，ml大肠杆菌细胞壁的脂多糖组分、色氨酸、热灭活的酵 母菌和热灭活的小麦赤霉病菌等四种诱导源诱导粉纹夜蛾、白纹伊蚊、草地贪夜蛾、 斜纹夜蛾、菜青虫、小菜蛾等六种离体培养的昆虫细胞，发现诱导后在细胞的上清 中产生了抗菌活性物质。诱导细胞的上清液经三氯乙酸沉淀提取诱导蛋白，采用琼 脂糖孔穴扩散法和比浊法测定了这些细胞的诱导上清对多种细菌和真菌的抗菌活 性。比较了不同诱导时间和诱导浓度对产生抗菌活性物质的影响。结果如下： (1)实验证明，LPS是一种较为有效的诱导源，可诱导多种细胞产生抗菌活性 物质。 (2)使用凹s诱导细胞，581、凹一10、SF．9、SL四种细胞经诱导后均能产生 抗菌活性物质，P】【和P“9两种细胞的诱导上清则未检测到抗菌活性。其中581细 胞经诱导后产生的抗菌活性物质的活力最强。 的关系，结果发现不同浓度的LPS诱导细胞产生的抗菌肽活性不同，不同细胞的最 C7·10细胞的最佳诱导浓度是10r4mg，ml；当诱导浓度达到1mg，ml时，细胞会出现 破裂死亡。 质的活力关系，研究发现诱导时间不同，细胞上清液的抗菌活性不同。诱导4—8h 后细胞上清液开始出现抑菌活性，随着时间延长，抗菌活力逐渐上升，581、sF．9 细胞均在16h左右达到最大值，凹．10细胞在36h左右达到最大值，再延长时间， 抗菌活力逐渐下降，48h后降至较低。 三种细胞经LPs诱导后所产生的抗菌活性物质的抗菌谱，发现都具有广谱的抗菌活 性，同时也发现不同细胞的诱导上清对不同细菌的抗菌活性存在差异。 (6)用Tricine sDs．PAGE分析了5Bl细胞诱导样品比对照样品多出1条较为 明显的蛋白带，分子量在5．2KD左右；c7．10细胞诱导样品比对照样品多出了2条 较为明显的蛋白带，分子量分别在7KD左右和5KD左右。 (7)采用灭活的小麦赤霉病菌和灭活的酿酒酵母诱导581细胞后发现，诱导 后产生了抗菌活性物质，该物质具有明显的抗大肠杆菌K12D3l和抗酿酒酵母的活 力。 关键词：脂多糖；真菌；诱导：昆虫离体细胞；抗菌肽；抗菌谱；nicinesDS II Abstract of are discoVeredantimicfobial AntimicIobial arcccntly type activity Peptides cxistiII arc host·defe瞄c imP0nant p印tidcs耻d org蛆ism锄dbiosphcrcwidcly．Thcy a roleini蛐alcand molccul％of蛔1atejnl_nmnity强dm萄or adaptiveim删mity。 play sharcc0衄on