中国青岛文昌鱼Bam32、TAPP基因的发现及其相关性质研究.pdf

摘要 本文综合应用现代分子生物学方法与技术，从核酸水平和蛋白质水平，对我 国海洋珍稀物种青岛文昌鱼Bam32、TAPP基因进行较为系统的研究。以期阐明 Bam32、TAPP在免疫系统进化过程中和其它生命活动中的重要性和特殊性。 通过对青岛文昌鱼卵巢cDNA表达文库的序列测定和生物信息学分析，获 得了编码文昌鱼TAPP的全长cDNA序列。通过5’．Race的方法获得了文昌鱼 是小分子，缺乏酶活位点，c端都有一个PH结构域。与Barn32不同的是，TAPP 的N端是一个PH结构域，而Barn32的N端是一个SH2结构域。 本文进行-TSouthernblot和基因组扩增并测序。结果显示文昌鱼Bam32在基 因组上出现了2个拷贝，具有8个内含子；而文昌鱼TAPP则有4个拷贝，具有10 个内含子。文昌鱼的TAPP基因除了不在脊索中表达外，在鳃、消化道、卵巢和 肌肉都有表达；文昌鱼Bam32只在鳃、消化道和卵巢中表达。考虑ilJBam32在免 疫系统中的特殊作用以及文昌鱼特殊的进化地位，我们的实验结果暗示文昌鱼的 鳃和消化道很可能是原始的淋巴样组织。通过RealtimePCR，发现在成鱼急性感 染刺激后，文昌鱼Bam32、TAPP的转录水平没有发生显著的变化，似乎和炎症 反应没有直接关系。 最后，本文还通过体外原核融合表达得到了文昌鱼Bam32、TAPP重组蛋白， 纯化并验证了文昌鱼Bam32、TAPP体外特异结合Ptdlns(3，4)P2的能力。 实验结果充分显示了Bam32、TAPP在生物进化过程中的重要性、特殊性和 活跃性，为我们进一步认识免疫系统的进化，尤其是在从无脊椎动物到脊椎动物 这一具有重大意义的转变过程中免疫系统的进化提供了新的视野。 关键词：文昌鱼、Barn32、TAPP、基因结构、转录模式、原核表达、磷酸肌醇 结合活性 Abstract A wascarriedoutonTheB molecule comprehensivestudy lymphocy【eadaptor of32 andTandemPHdomain kDa(Bam32、protein containing Chinese belcheri thelevelofDNAand tsingtaunese，at amphioxus，Branchiostoma methodsofmolecular aimistounderstandthe protein，using biology．The importance ofBarn32andTAPPforimmuneevolutionandtheir system biologicalactivity． Thefull cDNA TAPPwasobtainedfromeDNA length sequencesencoding of andbio-informatics Chinese expressionlibrary amphinxusovarybysequencing full eDNAofBand2wasobtainedfromChinese analysis．Thelength amphioxusby and 5-Race．Bam32TAPPshareseveral small of