花生根瘤菌吸氢基因及其共生表达的研究.pdfVIP

花生根瘤菌吸氢基因及其共生表达的研究 林志 (厦门大学生命科学学院) 摘 要 根瘤菌在共生固氮过程中用于放氢所消耗的能量至少占固氮总能量的 25％以上。具有吸氢能力的根瘤菌则能回收固氮反应过程中所放出的氢， 通过氢的氧化．部分回收因放氢所消耗的能量，从而提高根瘤菌与豆科作 物的共生固氮效率。 i经菌体PCR初筛，从花生根瘤菌基因文库中获得70个克隆子。分别提 取70个克隆予的重组质粒，经电泳检测，发现重组质粒大小均在40kb以 上。根据大豆根瘤菌和豌豆根瘤菌吸氢酶结构基因全保守序列设计一对引 物，对70个重组质粒进行PCR筛选，获得两个PCR阳性克隆子，分别含 I、BamH I对pZ61进行单 重组质粒pZ6l和pZ27。用限制性内切酶EcoR 酶切，双酶切及不完全酶切，构建了pZ61外源插入片段的物理图谱；同时 修正了pZ55外源插入片段物理图谱。以豌豆根瘤菌氢酶结构基因为模板， 以地高辛为标记制备hup基因探针，与文库克隆子重组质粒pZ61，口Z60， 反应。以含光合细菌Thiocapsa 交，发现9．2kb片段有强的杂交信号。 粒检测实验证明，重组质粒已被转入结合株中。在共生条件下，结合株 分互补恢复Ln．10aup3吸氢活性。)分别以含有豌豆根瘤菌吸氢基因 ～I～ 果表明：接种结合株LZ55所形成的花生根瘤，其吸氢活性分别比不接种 的、接种受体株Ln—l和接种对照株L618的提高约100％、95％和14％； 其固氮活性分别比不接种的、接种受体株和接种对照株的提高约96％、38 ％和34％；接种LZ55的花生产量比不接种的、接种受体株和接种对照株的 分别提高约15％、15％和7％。 关键词：花生根瘤菌，吸氢基因定位，共生表达 ～II～ Studieson GenefromRhizobiumarachis HydrogenUptake andIts Symbiotic Expression Lin Zhi ofLife (SchoolSciences，XiamenUniversity) Abstract 25％ fixation consumedmorethan Hydrogen bynitrogen generated process of total usedin evolved fixation．However，theH2 energy nitrogen bynitrogenase callbe in afewRhizobium inthe results recycl