宁夏地区牛结核病的分子流行病学调查.pdf

摘 要 目的：分离培养并鉴定牛源分枝杆菌；对分离获得的结核分枝杆菌复合群菌株进行基因多态 性研究，从分子流行病学角度分析宁夏地区牛结核病流行特点；对非结核分枝杆菌亲缘关系进行 研究，初步了解非结核分枝杆菌在本地奶牛中的流行情况。 方法：采集牛鼻拭子和牛咽拭子，对其进行处理，以罗氏培养法分离培养临床牛源分枝杆菌， 并应用PCR方法做进一步鉴定；采用基于PCR的VNTR分型方法，对结核分枝杆菌复合群临床 分离株进行多态性研究；采用ERIC方法对非结核分枝杆菌亲缘关系进行研究。 结果： 1．对2040份临床鼻拭子和咽拭子常规处理后，利用罗氏培养法对牛结核病病原菌进行分离 培养，应用PCR方法对形态学及涂片染色望阳性的细菌进行鉴定。共获得结核分枝杆菌复合群 杆菌，ll株为结核分枝杆菌)，2株是新疆分离株(2株均为牛分枝杆菌)。 2．采用VNTR基因分型方法，对7株东北地区临床株、本实验室分离培养的25株宁夏地区 临床株和2株新疆地区临床株进行基因多态性研究。在相似系数90％的水平上，得到26个基因 型，其中包含8个簇(每2株一簇)和18个独特基因型。相似系数80％的水平上形成10个簇， 3个独特基【天l型，最人一簇包含7株菌。 3．基冈分型结果表明，存在养殖场的奶牛结核病流行情况，但没有场爆发性流行情况。弓。夏 地区分离的ll株结核分枝杆菌中，l株为北京基冈型；6株东北地区结核分枝杆菌中，3株为北 京基冈犁。以上数据表明，。j。复和东北地区均存在北京基冈型菌株的感染情况。由丁．尚未有关于 牛源北京基冈型菌株的报道，冈此认为本实验中所研究的4株北京基冈型株可能是由人传染给牛。 某些不同养殖场的菌株间相似系数达剑了90％以上，可能这些场问存在奶牛相互引进时造成结核 病的传染。在相似系数80％的水平上，最人l簇包含的7株牛分枝杆菌，来白6个养殖场，冈此 认为该基闪型牛分枝杆凶凶株可能是。j。复牛分枝杆菌流行株；国内外数据比对结果显示，’j。复分 离株和国内、国际数据库的凶株相似皮较低。 4．采刖ERIC．PCR方法，对34株1卜结核分枝杆菌临床分离株的亲缘关系进行研究，通过聚 类分析图可知在75％的分类水平上，将34株1卜结核分枝杆菌分成ll组，9组成簇，2组独立， 最多的2个簇各包含7株菌。对两个人簇菌株来源进行分析，簇1菌株分离白JT场、HN场、 HG场；簇2菌株HS场、QL场、JT场。因此认为以上两簇所对廊的菌可能为易感染奶牛的1}!结 核分枝杆菌。 关键词：基冈分硝，结核分枝杆凶复合群，1卜结核分枝杆菌 Il Abstract isolate，incubateand thebovine conducta identify polymorphism objective：To Mycobaeterium；togenetic onthe tuberculosisandto the characteristicsofthebovine complexanalyzeepidemic study Mycobacterium tuberculosisin formthe of learnaboutthe situation Ningxia perspectiveepidemiology；to epidemic initially the inlocalCOW the non·-tuberculous of non··tuberculous ofthe mycobacteriabystudyinggenet