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中国野桑蚕线粒体基因组研究 特种经济动物饲养专业 硕士研究生：夏玉玲 指导老师：鲁成教授 摘 要 线粒体基因组作为细胞核外的一种遗传系统，具有完整性、多态性、自主性和小型性等独特的 优点。对线粒体基因组的研究主要体现在对基因的结构和功能、基因表达的时空调控、核质互作、 分子进化规律、物种的起源进化以及线粒体的起源等生物学领域的研究．陋是对野桑蚕线粒体基因 组的研究目前还处于初级阶段，对中国野桑蚕线粒体方面研究的报道更少。 许多研究证明。“家蚕起源于中国野桑蚕”。目前已经公布了四个家蚕品种和一个El本野桑蚕的 线粒体基因组全序列，但中国野桑蚕线粒体基因组的全序列还未见报道，它们之间的系统分析也少 有文献．开展中国野桑蚕线粒体基因组的研究，一方面可以丰富线粒体基因组数据库，另一方面通 过线粒体基因组比较分析，可以阐明其基因组成、基因排列和基因结构特点及其进化特点，通过系 统分析，可以进一步探讨中国野桑蚕与家蚕不同品种、El本野桑蚕的系统演化关系和基因标记的特 征。p7‘ 本论文主要测定和分析了中国野桑蚕线粒体基因组全序列，并且对物种间、品种间mtDNA的进 化特点和系统演化等进行了研究。 1．中国野桑蚕线粒体n№提取方法的建空5／由于野外环境的进一步恶化，野生材料越来越少。 介于此，为解决材料的时空影响限制。本研究探讨了不同的保存方法和不同细胞破碎方法中国野桑 蚕线粒体DNA提取影响，从而建立了一套优化方法。这种方法是先将材料置于一80℃下长期冻存，提 取时取出来解冻．研磨与匀浆相结合来破碎细胞，再用常规方法提取线粒体DNA。用这种方法获得 的mtDNA既解决了时空限制，又能用于扩增、酶切、克隆和测序。，X一一‘ 2．引物的筛选与分毛『双37个昆虫通用引物中有81％能用于扩增和测序。设计其他区域的引物 12个并将其扩增，最终可以完成全序列测定。：≥一)～ 3．中国野桑蚕线粒体基因组的分析结果． ((1)全序列及其结构分析：通过扩增、克隆、测序和拼接，获得了中国野桑蚕线粒体全基因组序 较4个家蚕品种年¨1个日本野桑蚕线粒体基因组多2个tRNA，其他组成承J排列与这5个序列相同。 与其它物种组成和排列都有不同。 与日本野桑蚕希I“夏芳”比较．有较大的数目多态性和睦度多态性。 (3)突变的比较：与日本野桑蚕比较，有23个编码基因序列发生了突变，共349个突变位点， 其中非编码区占277个。与“夏芳”比较，有25个编码基因序列发生了突变。共285个突变位点， 84。 其中非编码区136个突变。与日本野桑蚕和“夏芳”的转换／颠换分别为I．93和l (t)核苷酸的组成及碱基使用偏好性：基因组的碱基组成位于中等，AT含舒较高。、 4．中国野桑蚕mtDNA中各类基因的分析， 个不明：12个终止子为TAA，1个不明。非极性氨基酸占主导地位，其次是极性不带电的氨基酸。 编码线粒体DNA的基因时存在较大的AT偏好性，且更偏好使用T碱基。密码子的各位置组成中T和 A含量较高．G和C含量较低。 (2)tRNA的组成及二级结构预测：中国野桑蚕线粒体DNA序列与所比较的其他物种有所不同，包 并推测出各种二级结构。有17对碱基错配，3对难以匹配，还有1种有四个茎环结构的tRNA(见图 13)。大多数密码子序列与相应的反密码子不完全匹配． 784bp。这两个基因与家蚕蛾科的其它各序列相比相似性最高，其次是果蝇和蚊子与人的相似性较低。 个主干和10个环状结构组成。j一-。 5．中国野桑蚕线粒体基因组的系统分析。 f(1)基于COl部分基因的系统分析发现：日本野桑蚕聚为一类，再与中国安康地区野桑蚕和韩国 野桑蚕聚为一类。中国镇江的野桑蚕与家蚕品种C-108聚在一起。其他家蚕品种聚为一类。 (2)基于线粒体基因组和基因的基因树构建与分析发现：分别对6个材料(4个家蚕品种和2个 中野桑蚕雨f家蚕之间进化规律不太清楚。 由此而知，从线粒体角度可以证明家蚕与中国野桑蚕亲缘关系较近．由于线粒体基因的遗传具 有母性遗传的特点，又由于野桑蚕只受自然环境作用．家