ITIH4基因重组慢病毒干扰系统的构建.pdfVIP

·242· 中国癌症防治杂志2012 年9月第4 卷第3 期 Chin J of Oncol Prev and Treat，Sep 2012，Vol.4，No.3 基础研究 ITIH4基因重组慢病毒干扰系统的构建 吟 黄 敏 王 琪 张 玮 李 力 △ 作者单位：530021 南宁 广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科；桂林医学院附属医院妇产科 】 。 设计 ，退 【摘要 目的 构建ITIH4基因重组慢病毒干扰系统 方法 选取干扰效果最佳的siRNA片段， shRNA结构 火反 应形成双链后采用T4DNA连结酶与线性化慢病毒载体Psico连接，转化大肠杆菌后提取质粒，并经质粒DNA测序和 ，转染 。 PCR鉴定重组质粒构建是否成功 293T细胞并测定培养上液的病毒滴度 结果 测序结果显示，重组慢病毒干扰载 3 体Psico/ITIH4测序结果与设计的shRNA序列完全一致，转染293T细胞后，其病毒滴度为9.5伊10IU/mL。结论 成功地 构建了ITIH4基因的重组慢病毒系统，为今后深入研究ITIH4奠定了基础。 】 ； ； 【关键词 人类间琢胰蛋白酶H4重链 慢病毒载体 shRNA 】 】 】 【中图分类号 R373 【文献标识码 A 【文章编号 1674鄄5671(2012)03鄄05 doi:10.3969/j.issn.1674鄄5671.2012.03.09 Constructionofalentiviral vectorfor RNAinterference oftheITIH4 gene HUANG Min，WANG Qi，ZHANG Wei，LI Li（Department of Gynecological Oncology，Affiliated Cancer Hospital of Guangxi Medical 吟 University，Nanning 530021，P.R. China援 Department of Gynaecology and Obstetrics，Affiliated Hospital of Guilin Medical College， Guilin541001，P.R. China） Corresponding author:LI Li援E鄄mail:lili@ 【Abstract】Objective Toconstructalentiviralvectorfor RNAinterferenceoftheinter鄄琢鄄trypsininhibitorH4 （ITIH4）gene. Methods A short hairpin RNA（shRNA）targeting the ITIH4 gene was designed based on the optimal siRNA sequence.The double鄄stranded DNAs obtained after annealing were ligated with the linearized lentiviral vector Psico using T4 DNA ligase and transformed into