Wilms瘤基因1低表达和过表达乳腺癌细胞模型的建立.pdfVIP

Wilms瘤基因1低表达和过表达乳腺癌细胞模型的建立.pdf

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·1· 生堡至l腥痘苤查i鱼王题)垫!!生!旦筮!鲞筮垒塑£丛!』星塑!堡!f垦!型望!生曼塑i!!):垒!艘坠垫!!:!尘:Z:盟!:! 论著 Wilms瘤基因1低表达和过表达乳腺癌细胞 模型的建立 齐晓伟 杨新华 张毅 范林军 张帆 陈莉 唐振宁 张彦 杨晓宁 宗贝歌 胡保全王明浩姜军 【摘要】 和双链RNA(dsRNA),建立Wilms瘤基因1(wTl)低表达和过表达的乳腺癌细胞模型。方法以国外 学者提供的3条序列(siRNA-516、siRNA一803、siRNA一1029)构建wTl siRNA干扰表达WTl,以研究已证 2000)分 siRNA一516、WTlsiRNA一803、wTl siRNA一1029、阴性对照、脂质体组和空白细胞组;观察转染效率的时间 点为转染后24、48、72h。wTldsRNA的筛选实验分为3组:wTl dsRNA一319、阴性对照组和空白细胞组; 观察转染效率的时间点为转染后48、72、96 h。通过实时定量PCR(qRT—PCR)和WesternBlotting筛选作 用效果最明显的siRNA和dsRNA。使用单因素方差分析进行统计学分析。结果成功构建W1 siRNA-516、wTlsiRNA一803和wTl siRNA一1029共3个siRNA,并转染到MDA.MB-231细胞中,转染效率 hwTlsiRNA一1029 达90%以上。上述3个wnsiRNA均能够抑制wnmRNA和蛋白的表达,以转染后48 siRNA.1029组WTl 的效果最为显著[wTl mRNA表达水平与空白细胞组相比显著降低(0.49+_0.02比 1.00+_0.08,P=0.00),其蛋白表达水平也明显降低]。成功将wTldsRNA一319转染到MCF-7细胞中,转 h,MCF-7细胞的WTl过表达最为显著 染效率达90%以上。50p,mol/L的wTldsRNA一319转染后96 [wTldsRNA一319组的w.TlmRNA表达水平与空白细胞组相比显著升高(319.06±14.84比1.00+_0.07, P=0.00),其蛋白表达水平也明显升高]。结论成功建立低表达WTl的MDA·MB一231细胞和过表达 v卯1的MCF一7细胞模型,为后续进一步研究wTl在乳腺癌中的生物学行为奠定了基础。 【关键词】Wilms瘤基因1;RNA干扰;RNA激活;乳腺肿瘤 【中图法分类号】R737.9 【文献标志码】A modelsinbreastcancercells theWilms’tumor1lowand 叫 Establishmentof gene over-expression Yah, Li,TANGZhen—ning,ZHANG X洳-wei,YANGXin—hua,ZHANGYi,FANLinoun

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