高三生物二轮复习蛋白质的提取和分离学案.docVIP

高三生物二轮复习蛋白质的提取和分离学案 【考点要求】 1． 蛋白质的提取和分离 A 【基础梳理】 1．蛋白质存在于生物体的组织细胞中，不同的生物体组织细胞所含的蛋白质的种类、数量也不尽相同。要研究某种蛋白质的___________、____________和__________，就必须把这种蛋白质从组织细胞中分离、纯化出来。 2．在分离和纯化蛋白质之前，必须采用适当的方法使蛋白质呈__________状态释放出来。 思考：任何将蛋白质从组织释放出来？请简单描述其过程： 3．释放出来的蛋白质任何进行抽提？ 4．蛋白质的粗制品可能是多种蛋白质的混合物，其中还可能混有小分子化合物，必须进一步____________。 5．蛋白质纯化依据主要的原理是什么？试举例说明 6．电泳是指____________________________________________________________________。 思考：电泳速度和哪些因素有关： 7．目前应用较为普遍的纯化蛋白质的一种方法是___________________。支持物有_______ _______________________________________________等。 8．醋酸纤维薄膜电泳的方法具有____________、____________、______________、_____________、______________、______________、______________等优点。已广泛应用于_____________、____________和_____________（如_____________、_____________、_____________等的分离和鉴定）等方面。 9．凝胶色谱法也称做分配色谱法，是根据__________________________分离蛋白质的有效方法。 注：凝胶实际上是一些微小的多孔体，大多数由多糖类化合物所构成的，如葡聚糖或琼脂糖。 10．凝胶色谱法分离蛋白质的原理： 凝胶分子内部有许多贯穿的通道，当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质__________（容易/难）进入凝胶内部的通道，经过的路程较____（长/短），移动速度较____（快/慢）；而相对分子质量较大的蛋白质则____________________________ ______________________________________________________________________________。所以相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。 【例题1】利用凝胶色谱法，什么样的蛋白质先洗脱出来 （ ） A．相对分子质量大的 B．溶解度高的 C．相对分子量小的 D．所代电荷多的 11．缓冲溶液：在一定的范围内，缓冲溶液能够抵制外界的酸或者碱对溶液PH的影响，维持PH基本不变。 血红蛋白的提取和分离 12．蛋白质的提取和分离一般分为四步：__________、___________、_________和_________。 13．样品的处理： 1）红细胞的洗涤：目的是_____________，以利于后续步骤的分离纯化。 取血样-----离心-----取下层暗红色的红细胞----加5倍体积的生理盐水-----离心-----重复3次，至上清夜中无黄色，表明红细胞已洗涤干净。 思考：为了防止血液凝固，应加入______________________。 2）血红蛋白的释放 洗涤好的红细胞加__________至原血液体积，再加40%体积的甲苯，置于磁力搅拌器上充分搅拌10分钟，在________和甲苯的作用下，红细胞破裂，释放出血红蛋白。 3）分离血红蛋白溶液 将搅拌好的混合液转移到离心管中，以2000r/min离心10分钟，可明显看到试管中的溶液分成四层，第三层为红色透明液体，即血红蛋白的水溶液。第一层为无色透明的甲苯，第二层为白色薄层固体，是脂溶性物质的沉淀层，第四层为暗红色的其他杂质的沉淀层。 4）透析 取1mL的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有300mL的物质的量浓度为20mmol/L的磷酸缓冲液中（PH为7．0），透析12小时。 注：透析可以除去样品中分子量较小的杂质，也可以用于更换样品中的缓冲液。 14．凝胶色谱操作 1）凝胶色谱柱的制作 2）凝胶色谱柱的装填：注意不能有气泡的存在，一旦发现气泡，必须重装。装完后立即连接缓冲液洗脱瓶，用20mmol/L的磷酸缓冲液中（PH为7．0）充分洗涤平衡凝胶1