组织原位双重标记技术检测FasFasL系统在结肠腺癌早期诊断中的研究论文.docVIP

组织原位双重标记技术检测 Fas-FasL 系统在 结肠腺癌早期诊断中的研究  摘  要  目的：本实验采用 Fas、FasL 免疫组织化学染色和 TUNEL 法细胞原位 凋亡染色双重标记，主要探讨结肠粘膜上皮细胞恶性转化过程中，不同时相 Fas、FasL 的表达情况；Fas、FasL 的表达与结肠腺癌细胞和局部肿瘤浸润淋 巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte，TIL)凋亡之间的关系以及与结肠腺癌生 物学行为之间的关系。方法：收集结肠手术切除标本和相应的临床资料，分 为四组：正常结肠粘膜上皮 9 例；结肠良性增生性息肉 20 例；结肠腺瘤(包 括 I、II、III 级不典型增生)44 例；结肠腺癌 50 例。应用免疫组织化学法检 测结肠粘膜上皮细胞和 TIL 中的 Fas 和 FasL 表达，不复染细胞核，不封片， 再用 TUNEL 法检测凋亡的结肠粘膜上皮细胞和 TIL，分别用辣根过氧化物 酶和碱性磷酸酶两种酶系统显色，实现在同一结肠组织切片上同时从蛋白水 平和 DNA 水平观察相关抗原的表达情况和凋亡细胞的形态特点，并结合计 算机图像分析处理系统，定量癌细胞和 TIL 的凋亡指数（apoptosis index，AI）。 结果：Fas 在不同结肠组织中的表达规律是：结肠腺癌中表达最低，结肠 腺瘤、增生性息肉逐渐增高，表达水平最高的是正常结肠粘膜上皮。FasL 在 不同结肠组织中的表达规律与 Fas 正好相反，结肠腺癌中表达最高，结肠腺 瘤、增生性息肉逐渐降低，正常结肠粘膜上皮中几乎不表达 FasL。不同年 龄组之间(tFasPI=1.09，tFasLPI=0.83)、男女之间(tFasPI=1.12，tFasLPI=0.75)Fas、FasL 的表达均无显著性差异（p0.05），各分化程度之间(FFasPI=4.42，FFasLPI=5.85)、 不同的 Duke’s 分期之间（FFasPI=10.43，FFasLPI=3.52）、有无淋巴结转移之间 (tFasPI=2.31，tFasLPI=5.63)Fas、FasL 表达均有显著性差异（p0.05）。Fas(FasL) 的表达与结肠腺癌不同分化程度、不同 Duke’s 分期、淋巴结转移癌呈负(正) 1 相关。同一结肠腺癌组织切片或不同结肠腺癌组织切片中，Fas、FasL 表 达不均匀，癌细胞和 TIL 的 AI 也不同，Fas 阳（阴）性区的癌细胞、TIL 的 AI 均比 Fas 阴（阳）性区的癌细胞、TIL 的 AI 高（低），FasL 阳（阴）性区 癌细胞、TIL 的 AI 比 FasL 阴（阳）性区癌细胞、TIL 的 AI 高（低） p0.05）； Fas 阳性区癌细胞（TIL）的 AI 比 FasL 阳性区癌细胞（TIL）的 AI 高（低） （p0.05）；Fas 阳（阴）性区癌细胞的 AI 高（低）于 TIL 的 AI，FasL 阳（阴） 性区癌细胞的 AI 低（高）于 TIL 的 AI（p0.05）。结论：从正常结肠粘膜 上皮细胞向结肠腺癌转化的过程中，结肠粘膜上皮细胞中 Fas 的表达量逐渐 减少，FasL 表达量逐渐增多，结肠腺癌细胞的 AI 逐渐下降，TIL 的 AI 逐渐 增高，结肠腺癌细胞通过 Fas-FasL 系统的作用，清除癌旁 TIL，提示 Fas-FasL 系 统 在 结 肠 腺 癌 的 免 疫 逃 避 （ immune escape ） 及 免 疫 反 击 （ immune counterattack）中起重要作用。Fas、FasL 的表达与结肠腺癌的临床病理学 特征密切相关，可能作为结肠腺癌早期诊断和评估预后的重要参考指标之一。 关键词 组织原位双重标记；结肠；肿瘤；Fas-FasL；免疫组织化学；细 胞凋亡 2 Study of Fas-FasL System in the Early Diagnosis of Colon Adenocarcinoma Using Double-Labelling in Situ Abstract：Objective：To detect the relation among expression of Fas, FasL and apoptosis of colon adenocarcinoma cell, local tumor infiltrating lymphocyte (TIL) and colon adenocarcinoma’s biological behavior; expression of Fas, FasL on different stage during the canceration of colon mucous epithel