棉铃虫半胱氨酸蛋白酶的性质及抑制因子研究.pdfVIP

山东大学理学硕士论文 棉铃虫半肤氨酸蛋白酶的性质及抑制因子研究 摘 要 L}虫卵内蛋白酶在昆虫胚胎发育过程中降解卵黄蛋白质，供 给胚胎发育必需的氨基酸，对胚胎发育具有重要的作用。从60 年代至今已对家蚕、果蝇、蝗虫和蚊子等数种昆虫卵内蛋白酶进 行了研究，所报道的蛋白酶分属于半胧氨酸蛋白酶类、丝氨酸蛋 白酶类和天冬氨酸蛋白酶类。棉铃虫是严重危害棉花生产的害 虫，研究棉铃虫卵内存在何种蛋白酶、蛋白酶性质、受何种因子 抑制、活化及调控过程等分子生物学过程及机理，为杀卵农药研 制提供了理论依据。、， 本论文在前人工作的基础上，研究了棉铃虫 (Helicoverpa armigera)半耽氨酸蛋白酶的底物专一性，进一步阐明了该蛋白 酶的性质和应用前景。我们从棉铃虫卵中纯化出该蛋白酶，用电 泳方法检测了该蛋白酶对牛血红蛋白(Hb)，牛血清蛋白(BSA), 卵黄磷蛋白(Vn)，明胶(gelatin)等4种动物蛋白和大豆，玉米， 马铃薯，YL豆，向阳花种子及棉籽蛋白等6种植物蛋白的水解作 用。今果显示该酶对4种动物蛋白及6种植物蛋白都有明显水解 活性。用吸光度测定法测定了棉铃虫半胧氨酸蛋白酶对牛血红蛋 白，牛血清蛋白，卵黄磷蛋白，明胶等4种底物的米氏常数(Km) 值。结果显示棉铃虫半胧氨酸蛋白酶对牛血红蛋白和卵黄磷蛋白 的水解产物的吸光度值较高，而对牛血清蛋白和明胶的水解产物 的吸光度值较低，并测得该蛋白酶对牛血红蛋白，牛血清蛋白， 卵黄磷蛋白，明胶的Km值分别为 lOpmol/L,0.91gmol/L, 0.08pmo1/L,250mg/L，其中对卵黄磷蛋白的Km值最小，说明棉 铃虫半耽氨酸蛋白酶与卵黄磷蛋白的亲和力最大，即卵黄磷蛋白 是棉铃虫半跳氨酸蛋白酶的最适底物。同时我们还用电泳方法检 一 LL}r.}*9.一学硕士论文 测了该蛋白酶对粗提的棉铃虫卵黄磷蛋白的水解作用，结果显示 该酶对其有明显水解活性，由此推测该酶可能参与棉铃虫胚胎发 育中9。黄磷蛋白的水解冷 为了研究棉铃虫半耽氨酸蛋白酶抑制因子，我们首先选取了 已报道的存在半胧氨酸蛋白酶抑制因子的七种植物:玉米、马铃 薯、91豆、大豆、向阳花种子、·棉籽与大米为研究对象，用吸光 度法和电泳法 检测了它们对棉铃虫半胧氨酸蛋白酶的抑 制活性，初步证明了大豆、向阳花种子、棉籽与大米四种植物蛋 白粗提液中含有半肤氨酸蛋白酶抑制因子。然后选取了向阳花种 子作为实验材料从中纯化此种半胧氨酸蛋白酶抑制因子，首先过 Sephadex-G75分子筛层析柱，收集其中有活性的部分过 DEAE-Cellulose离子交换柱，得到此种抑制因子的纯化产物。为 进一步研究该半庇氨酸蛋百酶抑制因子打下良好的基础。 关键词:棉铃虫，。半耽氨酸蛋白酶;底物特异性，Km，抑制因尹 山东大学理学硕士论文 CHARACTERANDINHIBITOROFACYSTEINE PROTEINASEFROM EGGSOFCOTTONBOLL W ORM verpaarmigera Abstract Insecteggproteinasesplayimportantrolesinembryogenesis, sincetheydegradeyolkproteintoaminoacids,thenutrientof embryonicdevelopment.Severalspeciesofinsectshavebeenstudied oneggproteinasesince1960s,suchasBombyx,Drosophila, LocustaandArtemiaetal.Cysteineproteinase,serineproteinaseand asparticproteinasehavebeenidentifiedandpurified.Thecottonboll wormisakindofpestwhichseriouslydamagescotton.Theresearch onwhatkindsofproteinaseexittinginthecottonbo