超声微泡介导增强型绿色荧光蛋白基因转染视网膜神经节细胞的体内实验.pdfVIP

2011年 1O月第 33卷第 lO期 ChinJOculTraumOccupatEyeDis，Oct2Ql1Vo1． ．! · 733 · · 论 著 · 超声微泡介导增强型绿色荧光蛋 白基 因 转染视网膜神经节细胞的体 内实验 田萍 喻应贵 宇成达 陈鸣 杨蓉 摘【要】 目的 验证超声微泡介导增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因能否在体内成功转染视网 膜神经节细胞(RGCs)，是否比传统的转染方式效率高以及这种转染方式是否损伤 RGCs。方法 将 SD大鼠50只随机分为4组：正常对照组 (n=5)、单纯质粒组 (n=15)、质粒+超声组 (n=15)、超声 微泡组 (n=15)。采用玻璃体腔注射试剂的方法，正常对照组注射5 l生理盐水；单纯质粒组，注射5 质粒；质粒 +超声组，注射5 质粒后，立即用0．5W／em 超声波辐照大鼠眼球60s，工作时间控 制为 1／3(即辐照5s，停 10s，共60s)；超声微泡组，注射质粒微泡混悬液5 1后，立即用前述同等能 量超声波辐照大鼠眼球。7d后 ，取大鼠眼球制作视 网膜铺片、冰冻纵切片及视网膜 EGFPmRNA的 RT—PCR。用荧光显微镜观察铺片及切片中EGFP在 RGCs的表达情况。用RGCs计数观察RGCs损 伤情况 I2J。用RT．PCR对 EGFPmRNA进行半定量检测。结果 超声微泡介导 EGFP基 因转染 RGCs的效率明显高于正常对照组、单纯质粒组和质粒 +超声组，且对 RGCs无明显损伤。结论 在 低频超声波的照射下，超声微泡能够在体内安全、有效地介导EGFP基因转染RGCs。 【关键词】 超声微泡造影剂；视网膜神经节细胞；基因治疗；增强型绿色荧光蛋白 ExperimentofultrasoundmicrobubblemediatinggeneEGFPtransfectingretinalganglialcellsinvi· vo．TIANP ，YUCheng—da，CHENMing，eta1．DepartmentofOphthalmology，TheFirstPeople’shospital ofChendu，Chendu，Sichuan610041，China Correspondingauthor：TIAN P ，Email：tianping626@ sohu．corn A【bstract】 Objective ToinvestigatewhetheruhrasoundmicrobubblecouldmediategeneEGFP transfeetingretinalganglialcells(RGCs)invivo，whetherthistransfeetionwayismoreeffectivethantheor- thodoxwayandwhetherthiswaycouldcausedamageofRGCs．Methods FiftySD ratswererandomlydi— videdinto4groups：thenormalcontrolrgoup(n=5)，plasmidrgoup(n=15)，plasmid+uhrasoundgroup (n=15)andultrasoundmicrobubblegroup(n=15)．Thenormalcontrolrgoupwasinjected5IxLnormal salineintovitreouscavity．Theplasmidrgoupwasinjected5txLplasmid．Theplasmic+ultrasoundgroupwas injected5IxLplasmid，thenweexposedratseyeballsto0．5W／cm ultrasonicwaveimmediatelyfor60s(the exposuretimeaccountingofr1／3：theexposuretimeis5s，thenpause10 s，totaltime60s．Theultrasound microbubblergoupwasinjected5 Lsuspensionofplasmidandmicrovesicle，thenweexposedratseyeballs astheabovewayimmediately．Sevendayslater，wemadestretchedp