抑制素基因工程疫苗研究与应用.pdf

㈣『Jf『 40 ～ 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目 { j (项目编号：BRF060104) 提供资助。 Funded by TheCentral Research for Institutes Level，Non—profit,Scientific Basic Fund ResearchDevelopmentOperations Special 1 (No．BRF060 04)． f1 b一 } ‘ 抑制素基因工程疫苗的研究与应用 研究生：郭宪 指导教师：赵兴绪 教授 甘肃农业大学动物医学院，甘肃兰州，730070 中文摘要 本文综合应用生物信息学技术、基因克隆技术、蛋白质分析技术、基因免疫技术、 酶免疫测定技术、放射免疫测定技术等，以猪抑制素a亚基(1～32)基因及绵羊补体 C3d基因作为选择基因，制备串联抑制素基因工程疫苗，用于基因免疫绵羊，研究串联 抑制素基因免疫对母羊生殖及生殖内分泌的影响，探讨其作用机制。通过串联抑制素基 因疫苗应用研究，探索串联抑制素基因疫苗免疫方案，达到提高绵羊繁殖力、降低生产 成本、推广繁育新技术的目的，并为抑制素基因疫苗的成功研制奠定基础。主要内容如 下： 1．猪抑制素a亚基抗原表位的预测 技术，分析猪抑制素a亚基的二级结构、抗原表位、亲水性、疏水性、Coil区域、易溶 性等理化特性，旨在预测其抗原位点和抗原表位。结果表明：猪抑制素a亚基可能的抗 结构，对抗原表位的形成有一定的影响，所以猪抑制素a亚基的抗原表位可能位于1～ 32。 2．串联抑制素基因疫苗的制备与鉴定 应用基因克隆技术，以猪抑制素a(1～32)基因及绵羊补体C3d基因为选择基因， 串联抑制素重组质粒 pcDNA-DPPISS-DINH-sC3d3。通过酶切鉴定， 获得了分泌型表达，为羊抑制素基因工程疫苗的研制奠定了基础。 3．串联抑制素基因疫苗对绵羊生殖激素的影响 法(ELISA)检测抗抑制素抗体、放射免疫法(R认)测定处理后不同时期血清中激素 绵羊后，各实验组P／N值均显著高于对照组(尸0．05)，且在第3次加强免疫后抗体水 平明显上升。首次免疫后，促卵泡素(FSH)平均含量均高于对照组，且在第2次、第 照组(尸O．05)。这些结果表明，串联抑制素基因免疫绵羊可促进FSH分泌，进而影响 绵羊卵泡发育和诱导绵羊产双羔。 4．串联抑制素基因免疫诱导绵羊孪生的研究 为了研究串联抑