小麦叶片水分胁迫下cDNAAFLP差异表达分析.pdfVIP

小麦叶片水分胁迫下cDNA-AFLP 差异表达分析 摘 要 干旱是目前对作物生产力影响最大的环境胁迫因子，所造成的产量损失超过其他各种胁迫因子 造成损失的总和。作物的抗旱性状由多基因控制，受遗传等因素影响。作物对干旱的耐受性在一定 程度上具有相同的分子基础，很多基因的表达受水分胁迫的诱导并在作物抵抗水分胁迫中起作用。 如何提高作物的抗旱性，使作物能够在干旱胁迫环境下获得较高的品质和理想的产量，一直是人们 关注的焦点和研究的热点。探明耐旱作物对干旱胁迫的分子反应机理，对作物抗旱育种以及抗旱栽 培技术等研究具有重要的现实意义。 本实验以新疆春小麦主栽品种新春6号为实验材料，新春6号是一个典型即抗旱又具备高水分利 用效率的品种。利用cDNA-AFLP技术分析该品种在两叶一心水分胁迫下基因表达的差异，建立了一 套适合小麦叶片基因表达差异的研究体系，并获得一些可能与小麦抗旱和水分高效利用相关的基因 表达序列标签。研究结果如下： (1)通过实验比较，确定了适合小麦叶片cDNA-AFLP分析的总RNA提取方法。 (2) 比较了两套cDNA-AFLP方案，双酶切法在实验结果的多态性、可靠性等方面优于单酶切法， 确定双酶切法cDNA-AFLP更适合水分胁迫下小麦基因表达差异的研究。 (3)依据双酶切法cDNA-AFLP基本原理，对技术体系进行研究，并对扩增体系进行优化，建立了 一套适合小麦基因差异表达研究的cDNA-AFLP技术体系。 (4)实验对新春6号两叶一心水分胁迫进行了基因表达差异分析，利用253对选择性扩增引物分析， 发现748条差异条带，回收了44个，这些差异条带均表现为上调差异类型。 (5)选取10 条差异条带进行了克隆测序，利用BLAST 对差异表达片段序列进行序列同源性分析。 10 个序列在 BLAST 数据库中均找到同源序列，主要涉及信号转导、转录调控、能量代谢、细胞生 长发育和逆境响应等类别：1)应答水分胁迫的生长发育基因：主要有与线粒体 26rRNA 基因和线粒 体基因同源性较高的 TDFHh2- 1、TDFHh4-3 和 TDFHh3-3 ；与叶绿体DNA 序列有较高的同源性的 TDFHh7- 1。2)应答水分胁迫的细胞代谢基因：主要有与NADH 脱氢酶7 亚基和丙酮酸激酶同源性较 高的TDFHh15-2 和TDFHh16-2 。3)应答水分胁迫的响应和防御基因：主要有与细胞色素P450 和反 转录转座子mRNA 同源性较高的TDFHh1-3 和TDFHh6-4 。4)应答水分胁迫的未知功能基因：与玉 米mRNA 序列和假定蛋白同源性较高的TDFHh17-3 和TDFHh21- 1。 关键词：小麦；水分胁迫；cDNA-AFLP ；基因表达差异 I Identification of Differentially Expressed Genes by cDNA-AFLP Approach During Water Stress in Wheat Leaves Abstract Drough is an environmental stress facror which has the most impact on crop productivity, yield losses caused by it is more than the sum of the loss by other stress factors. The drought–resistant trait of plant is controlled by many genes, and influenced by genetic and other factors. To some extent, drought tolerance of crops have similar molecular basis of the expression of many genes induced by water stress and water stress resistance in crops. How to improve the drought resistance