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湖南长郡卫星远程学校 2009年上学期 制作 03 两个主要目的： 　　(1)从土壤中分离出能够分解尿素的细菌； 　　(2)统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌。 水生耐热细菌Taq ( Thermus aquaticus ) 耐高温的Taq DNA聚合酶 美国微生物学科布鲁克（T.Brock) 1966年发现耐热细菌 研究思路 （一）筛选菌株 尿素分子的立体结构 CO(NH2)2+H2O CO2+2NH3 脲 酶 分解尿素的细菌: 培养基配方 1.0g 尿素 15.0g 10.0g 0.2g 2.1g 1.4g 葡萄糖 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至1000mL 琼脂 MgSO4·7H2O Na2HPO4 KH2PO4 　　在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 选择培养基 背景知识 测定微生物数量的方法： 1．直接计数法： 　　最常用显微镜直接计数法。 测定微生物数量的方法： 背景知识 1．直接计数法： 　　最常用显微镜直接计数法。 　　先将待测样品制成悬液，然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数。根据在显微镜下观察到的微生物数目来计算出单位体积内的微生物总数。 测定微生物数量的方法： 背景知识 优点：　　设备简单、能观察微生物的形态特征。 优点：　　设备简单、能观察微生物的形态特征。 缺点：　　难以计数微小量多的细菌。　　 一般用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。 2．间接计数法： 　　最常用稀释平板计数法。 　　 （二）统计菌落数目 （二）统计菌落数目 统计菌落数目的理论依据： 　　当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。因此，恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键。为了保证结果准确，通常将几个稀释度下的菌液都涂布在平板上，培养后再选择菌落数在30～300的平板进行计数。 每克样品中的菌株数 = (C÷V)×M C：某一稀释度下平板上生长的平均 菌落数 V：涂布平板时所用的稀释液的体积 (ml) M：稀释倍数 　　统计的菌落往往比活菌的实际数目低。这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。 注意： 　　 两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。 　　1.第一位同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。 　　2.第二位同学在该深度下涂布了三个平板，统计的菌落数分别为21、212和256，该同学以这三个平板菌落数的平均值163作为统计结果。 实例1 　　你认为哪位同学的结果更接近真实值？这两位同学的实验需要改进吗？如果需要，如何改进？ ? 　　你认为哪位同学的结果更接近真实值？这两位同学的实验需要改进吗？如果需要，如何改进？ 　　第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。 ? 湖南长郡卫星远程学校 2009年上学期 制作 03