马铃薯Y病毒复制酶NIb和雪花莲凝集素GNA双价转基因植物的抗病性和抗虫性研究.pdfVIP

摘 要 将双35S启动子引导组成表达的5’末端缺失381bp的马铃薯Y病毒复制酶 (PVYNlb)基 因和COYMV启动子引导韧皮部特异表达的雪花莲凝集素(GNA)基因构建成双价植物表达载体， 采用叶盘法，通过农杆菌介导法将其分别转化烟草K326和马铃薯紫花白，获得了一批再生植株。 PCR及Southernblot分析表明，Nlb基因和GNA基因己经成功的整合到烟草和马铃薯的基因组 中。转基因烟草的Northemblot和Westernblot结果表明，GNA在转基因烟草中得到了有效的表 达。对双价转基因烟草摩擦接种病毒进行了抗病性试验，同时进行了离体和整株抗蚜试验，结果 表明对PVY-C的抗性植株占试验植株的86%，对桃蚜(Myzuspersicae)的抗性植株占试验植株的 63%，有51%的双价转基因烟草植株对PVY的侵染和桃蚜的取食均具有较强的抑制作用。首次将 抗病基因和抗虫基因相结合，得到了双抗转基因植物。双价转墓因马铃薯的病毒抗性和蚜虫抗性 正在研究中。 洲 利用PVYCP基因内第272位的XhoI位点，经限制酶消化后得到5’末端缺失272bp的CP 突变体，称为△CP 技术使其5’末端引入起始密码子，构建植物表达载体pBinACP, 采用叶盘法，通过农 ，_笋竺入姻草K326.PCR和Southern.blot坪明ACP基因已经 成功地整合到烟草的墓因组中，转基因烟草分别用PVY-C,PVY和PVYv)探接种后，症状的观察 和ELISA检测结果表明，转基因植物中，对这三个株系的PVY病毒均存在抗性植株，个别植株可 对其中两个株系产生较高的抗性。Westernblot分析表明，在抗病植株和感病植株中均有△CP 基因的表达，抗性的产生与转基因蛋白表达之间是否有关还有待于进一步深入研究。 为进一步研究PVYCP基因介导的植物抗病毒机理，通过Northernblot检测了已经证明的转 基因植株在接种病毒前和接种病毒后转基因的mRNA含量变化.结果表明，抗病植株在接种病毒 后，转基因的。RNA含量大大降低;感病植株接种病毒后转基因的二RNA含量甚至升高了。表明PVY CP基因介导的抗性可能是在RNA水平上作用的，在抗病植株中可能发生了由转基因的转录后沉默 而引起的mRNA的特异性降解. 关键词 马铃薯Y病毒 复制，，，，花莲凝集，}q}l}因植物 喇 ABSTRACT Twoforeigngeneswereused，。construct。plantexpressionvector,thefirstofwhichwasthePVY replicase(Nth)genewithadeletionof381bpinthe5end,drivenbytheenhancedCaMV35S promoter,whichdirectsforeigngeneinaconstitutiveexpression,andthesecondforeigngenewasthe snowdroplectin(GNA)gene,drivenbyCoYMVpromoter,whichdirectsforeigngeneina phloem-specificexpression.LeavestripesoftobaccoplantcvK326andpotatoplantcvZiHuabaiwere transformedwithA.tumefaciensLBA4404harboringtheaboveexpressionvector.PCRandSouthern blotanalysisshowedthatforeignNthandGNAgeneshaveinsertedintothegenomicDNAoftobacco