山西省吕梁市石楼县石楼中学生物选修3：1.2《基因工程的基本操作程序》学案.docVIP

【本节重难点】 重点：基因工程基本操作程序的四个步骤 难点：（1）从基因文库中获取目的基因 （2）利用PCR技术扩增目的基因 【知识精讲】 教材梳理 基因工程的基本操作程序主要包括四个步骤：目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。 知识点一 目的基因的获取 1.获取目的基因是实施基因工程的第一步。目的基因的获取方法主要有两种：①从自然界中已有的物种中分离出来 ②用人工的方法合成。 2.基因文库——将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，成为基因文库。 基因文库根据其大小可分为基因组文库和部分基因文库。 受体细胞是指接受目的基因的细胞，即表达载体导入的细胞。 基因工程常用的受体有细菌、真菌、动植物细胞（1） 载体DNA必需有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到载体上去。这些供目的基因插入的限制酶的切点所处的位置，还必须是在质粒本身需要的基因片段之外，这样才不至于因目的基因的插入而失活。 （2）载体DNA必需具备自我复制的能力，或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制。 （3）载体DNA必需带有标记基因，以便重组后进行重组子的筛选。 （4）载体DNA必需是安全的，不会对受体细胞有害，或不能进入到除受体细胞外的其他生物细胞中去。 （5）载体DNA分子大小应适合，以便提取和在体外进行操作，太大就不便操作。 实际上自然存在的质粒DNA分子并不完全具备上述条件，都要进行人工改造后才能用于基因工程操作。 A.解旋酶 B.DNA连接酶 C.限制性内切酶 D.RNA聚合酶 分析：本题考查的知识点是DNA分子杂交原理选项BD可以直接排除对于选A可能理解的：既然是检测突变的部位,那么很自然想到用该基因的探针，进行碱基互补配对杂交而检测之(相关知识教材鉴定人猿亲缘关系和基因工程处都有所涉及)，但是分子杂交的前提必须是单链DNA，于是很自然想到用解旋酶处理被检测基因。但是，解开DNA双链结构一定要用解旋酶，在高温或者用强碱溶液处理也可以得到单链DNA，而且题干上也有必须使用的酶的叙述，所以可以排除A选项。C选项限制酶只是把原DNA切成很多片段，其中某个片段可能包含突变的目的基因，然后再用化学方法处理成单，最后再和探针杂交，根据放射性(或荧光)出现部位而检测出突变部位这种技术其实就是所谓的基因诊断他方法把DNA处理成单链但是，已经变性成单链的DNA很有可能常温下复性，可能回折重新形成许多双链区，如果恰恰突变部位及其临近区域和该单链其他区域结合成双链，那么必然影响探针与相应部位的结合，也就无法准确检测到突变部位。：本题考查的是基因工程的相关知识。基因工程很容易与其他知识相联系命制综合题，如基因操作基本步骤中目的基因的获取常与“中心法则”、“碱基互补配对原则”相结合，还可与基因的结构、发酵工程、基因的遗传定律相结合进行综合考查，是学习和重点之一。完全按照人的意愿，由重新组装基因到新生物产生的生物科学技术，就称为“基因工程”，或者说是“遗传工程”。在基因工程中，人工合成目的基因的途径有两条，其中之一就是以信使RNA这模板经过反转录合成目的基因；基因工程常用的受体有细菌、真菌、动植物细胞；原核生物的基因中无内含子，若将真核生物的基因转入原核生物，需除去内含子部分；在本题操作过程中，若在含有同一种限制酶切割的运载体和目的基因混合物中，加入DNA连接酶将会形成3种环状DNA分子，运载体自连而成的环状DNA分子，目的基因自连而成的环状DNA分子，运载体与目的基因片段相连的环状DNA分子。 答案：(1)信使RNA(mRNA) 逆转录(反转录) 双链DNA(目的基因) (2)动植物细胞　除去内含子(3)3 运载体自连的、目的基因自连的、运载体与目的基因片段相连的环状DNA分子 ：基因工程常用的受体有细菌、真菌、动植物细胞 　） A．采用反转录的方法得到的目的基因有 B．用同种限制酶处理质粒和含目的基因的DNA，可产生相同的黏性末端而形成重组DNA分子 C．番茄的叶肉细胞可作为受体细胞 D．对于目的基因在番茄的叶肉细胞中的表达是不可缺少的 DNA，这样可产生相同的黏性末端以便能而形成重组DNA分子。基因工程中，常用的受体细胞有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等，因此番茄的叶肉细胞可作为受体细胞。在基因表达的过程中，对于目的基因在番茄的叶肉细胞中的表达也能起一定的作用，是不可缺少的因此，只有A答案错误。 A 点评：启动子、终止子不属于结构基因，不能翻译出蛋白质，因此，采用反转录的方法得到从基因文库中找到所需要的基因．有关基因工程的叙述正确的是( )A．限制酶只在获取目的基因时才用