转录调控因子DNMT3b在肝癌细胞SMMC7721中作用.pdfVIP

郑州大学2007届硕士研究生论文 转录调控因子的DNMT3b在SMMC7721细胞中的作用 转录调控因子DNMT3b在肝癌细胞SMMC7721中的作用 硕士研究生 王佳辰 导 师 王家祥教授 防伟召l教授 郑州大学普通外科 郑州450052 摘 要 肝癌是人体常见的致命性肿瘤，预后差，严重威胁人类的健康，因此深入研 究肝癌的发生发展机制，进而加强肝癌的防治具有重要意义。 随着分子生物学的发展，已逐渐认识到表遗传学(Epigenetics)调节与肿瘤 基因的转录调控密切相关；因为这种表遗传学调节不改变基因编码序列，并且 是可逆的，因而越来越受到重视。研究表明，表遗传学或／和遗传学改变均可引 起肿瘤的发生是一个涉及多种肿瘤基因功能改变的多步骤过程，其中肿瘤抑制 基因的功能失活为细胞的恶性转化所必需。由DNMTs催化完成的DNA甲基 化是DNA的一种天然修饰方式，是表遗传学主要内容之一，其在基因的表达 调控、胚胎发育调节、基因组印记、X染色体失活及肿瘤的发生等许多方面发 挥着重要的作用。 分化的胚胎干细胞，催化DNA的从头甲基化，在正常体细胞中表达很低。CPG 岛是公认的基因表达调控区域。大约50％的CPG岛位于基因启动子区域。在 正常细胞大部分的启动予区域CPG岛是未甲基化的。由DNMT3b催化的肿瘤 抑制基因启动子区CPG岛的甲基化反应，使CPG岛甲基化状态改变导致该基 因表达沉默，进而引起肿瘤的发生。我们的研究也发现，在肝细胞恶性转化过程 中，FHIT基因(一重要的肿瘤抑制基因)的表达明显受抑制，用siRNA抑制 DNMT3b表达后，FHIT基因又恢复表达，但这一过程中，FHlT基因启动子区 域CpG岛并未被甲基化，由此提示在肝细胞恶性转化过程中DNMT3b除发挥 DNA甲基转移酶作用外尚有转录调控因子的作用。事实上，DNMT3b具有 PWWP和PHD结构域，而这些结构域与蛋白质．蛋白质间的相互作用有关，说 明DNMT3b已经具备了作为信号传导分子的基础。以前的研究多集中于 DNMT3b作为酶的功能，而其作为转录调控因子的功能目前尚未见报道。 郑州大学2007届硕士研究生论文 转录调控因子的DNMT3b在$MMC7721细胞中的作用 transdllCCrsandactivatorsof 信号转导子和转录激活子(Signal transcription， STATs)是一重要的核转录因子．STATs家族成员参与了许多细胞因子、生长因 子的信号传导，在调节人体免疫反应、炎症反应和细胞的生长、分化、凋亡等 方面发挥着重要作用，与人类恶性肿瘤的发生、发展和演进有关。据文献报道， 异常表达，而STATs在肿瘤的发生发展中，启动子区甲基化状态不变。有研 究表明：STATs及其下游基因在肿瘤的发生、发展过程中起到重要作用。如； 生、增殖、分化、凋亡、血管生成和侵袭转移等多方面都发挥了重要作用。如 信号传导通路的存在，这就说明DNMT3b即可以作为DNA甲基转移酶催化基 因的甲基化，影响基因的表达，又可以作为转录调控因子发挥作用。这就进一 步揭示了DNMT3b功能的多样性，为肿瘤的基因治疗提供新的靶点，为肝癌 的防治提供新思路。 方法 1、传代培养SMMC7721细胞； 的表达改变； 胞计数板计数转染细胞和未转染细胞的细胞数量； 5、用Western 等的表达改变情况； 6、处理所得数据，得出结论。 结果 1、在SMMC7721细胞转染DNMT3bsiRNA48h后，通过Wcstcrn Blotting 检测DN