乳铁蛋白对铜绿假单胞菌杀菌作用及其机制研究.docVIP

华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文 中文摘要 第一部分 乳铁蛋白对铜绿假单胞菌生长和毒力因子表达 的调节及其机制 目的 研究乳铁蛋白对铜绿假单胞菌的杀菌性以及毒力因子表达和生物被膜形成的作 用，同时探讨铁离子对其作用的影响。 方法 分别将乳铁蛋白溶液、FeCl3 溶液及乳铁蛋白与 FeCl3 混合溶液分别加入到铜绿 假单胞菌培养基（OD600=0.05）中，以倍比稀释平板培养法检测活菌数评价其杀菌活 性；以氯仿、盐酸萃取法定量检测绿脓菌素；以刚果红弹性蛋白检测弹性蛋白酶活性； 结晶紫法定量检测生物被膜；以结晶紫染色法，在光镜下观察生物被膜形态。 结果 乳铁蛋白对铜绿假单胞菌具有杀菌活性，同时抑制绿脓菌素生成、弹性蛋白酶 活性和生物被膜形成，其作用与浓度成正相关；FeCl3 促进铜绿假单胞菌生长，增加 绿脓菌素生成和弹性蛋白酶活性，并进生物被膜形成；乳铁蛋白与铁结合后其杀菌性 减弱，对绿脓菌素生成、弹性蛋白酶活性和生物被膜形成的抑制作用减弱。 结论 乳铁蛋白对铜绿假单胞菌具有杀菌活性，能抑制毒力因子的表达，其作用受铁 离子的影响，可能部分地与其铁螯合能力有关。 关键词：铜绿假单胞菌，毒力因子，杀菌性，生物被膜，乳铁蛋白，铁离子 13 华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文  第二部分  铁螯合剂对铜绿假单胞菌生长和毒力因子表达  的调节及其机制 目的 研究铁螯合剂 8-羟基喹啉、甲磺酸去铁胺对铜绿假单胞菌的杀菌性以及毒力因 子表达和生物被膜形成的影响。 方法 分别将 8-羟基喹啉溶液、甲磺酸去铁胺溶液及各自与 FeCl3 混合溶液分别加入 到铜绿假单胞菌培养基（OD600=0.05）中，以倍比稀释平板培养法检测活菌数评价其 杀菌活性；以氯仿、盐酸萃取法定量检测绿脓菌素；以刚果红弹性蛋白检测弹性蛋白 酶活性；结晶紫法定量检测生物被膜；以结晶紫染色法，在光镜下观察生物被膜形态。 RT-PCR 法检测相关基因 mRNA 的表达。 结果 8-羟基喹啉、甲磺酸去铁胺均表现为抑制细菌生长、绿脓菌素合成、弹性蛋白酶 活性和生物被膜形成，同时促进荧光素的表达；8-羟基喹啉螯合铁后对细菌生长、绿 脓菌素合成、弹性蛋白酶活性和生物被膜形成的抑制作用增强，而甲磺酸去铁胺则反 而促进细菌生长、绿脓菌素合成、弹性蛋白酶活性和生物被膜形成。 结论 铁螯合剂对铜绿假单胞菌的作用与其和铁的螯合能力和结构有关。铁饱和 8-羟 基喹啉可能通过新的机制对铜绿假单胞菌发挥作用。 关键词：铜绿假单胞菌，毒力因子，杀菌性，生物被膜，铁螯合剂 14 华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文 第三部分 乳铁蛋白源性多肽和乳铁蛋白肽嵌合体 对铜绿假单胞菌的作用 目的 研究乳铁蛋白源性多肽和乳铁蛋白肽嵌合体对铜绿假单胞菌的杀菌性以及毒力 因子表达和生物被膜形成的影响。 方法 分别将 LFcin 溶液、LFampin 溶液、LFchimera 溶液及 LFcin 与 LFampin 混合溶 液分别加入到铜绿假单胞菌培养基（OD600=0.05）中，以倍比稀释平板培养法检测活 菌数评价其杀菌活性；以氯仿、盐酸萃取法定量检测绿脓菌素；以刚果红弹性蛋白检 测弹性蛋白酶活性；结晶紫法定量检测生物被膜；以结晶紫染色法，在光镜和荧光显 微镜下观察生物被膜形态。 结果 LFcin、LFampin、LFchimera 对铜绿假单胞菌具有杀菌活性，能抑制毒力因子 的表达和生物被膜的形成，而且 LFchimera 的作用强于其组成多肽 LFcin、LFampin 及其混合物。 结论 乳铁蛋白源性多肽和乳铁蛋白肽嵌合体，尤其是 LFchimera 对铜绿假单胞菌具 有良好的抗菌活性，有望用于治疗铜绿假单胞菌感染。 关键词：铜绿假单胞菌，毒力因子，杀菌性，生物被膜，乳铁蛋白，多肽 15 华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文 ABSTRACT Part Ⅰ The effect of lactoferrin and iron on the viability and expression of virulence factors in Pseudomonas aeruginosa Objective To study the bactericidal activity of lactoferrin against Pseudomonas aeruginosa, and its effect on the expression of virulence factors and biofilm formation, at the same time to explore the influence of iron on its activity. Methods