去甲基化抑制剂和组蛋白去乙酰化转移酶抑制剂对前列腺癌细胞株雌激素受体影响.pdfVIP

·中文论著摘要· 去甲基化制剂和组蛋白去乙酰化转移酶抑制剂对前 列腺癌细胞株雌激素受体的影响 刖看 表观遗传学被描述为没有DNA序列变化、可遗传的表达改变。研究表明表观 遗传学改变在肿瘤发生中扮演一个重要角色，肿瘤发生中的主要表观遗传学改变 是抑癌基因发生DNA异常甲基化和染色质中的组蛋白修饰。表遗传改变也是一个 致癌事件；但是与遗传学改变不同的是，表遗传学的改变是可逆的。通过使用DNA 甲基化酶抑制剂和组蛋白去乙酰化转移酶(地∞C)抑制剂可以使表遗传静止的基 因恢复活性，从而逆转肿瘤的恶性表型或延缓肿瘤的进展。表遗传修饰可逆的特性 提示它可作为肿瘤患者进行治疗的靶标。 DNA甲基化调节基表达及某些抑癌基因高甲基化失活与肿瘤发生相关的理论 已得到广泛认同。DNA甲基化调节基因表达与组蛋白去乙酰化的作用密切相关。 DNA甲基化可诱导局部组蛋白脱乙酰化，使染色质乙酰化水平降低，且甲基化的 (MeCP．m如C)，发挥对基因表达的抑制作用。因DNA甲基化失表达的抑癌基因 能否通过去甲基化制剂或／和HDAC抑制剂的作用重新表达为本次研究的目的。 雌激素受体属于配体激活的核转录因子超家族的一员。分为二型，ERQ和ER 13；ER Q位于前列腺基底上皮细胞和基质问隙，ERB位于前列腺腺体上皮间隙，目 前认为雌激素对于前列腺上皮的作用是通过ER 13信号途径。Pasquali等研究表明 在前列腺癌中没有发现ER13表达。然而，Lcav等报道ER13在高级别发育异常中 免疫活性减少，但在高级别肿瘤和转移性前列腺癌中重新出现，进而有人认为同 乳腺癌一样，前列腺癌中即使有表达的ER13可能是野生型ER13的变异体，ER13具 有调节细胞生长抑制的作用，其发生变异突变可能导致抗雌激素治疗不敏感或使 癌细胞更具侵袭性。而目前绝大多数免疫组化染色研究仅仅用一种ER13抗体，难以 区分其他各种ER 13在大多数前列腺癌 13亚型的蛋白表达情况。相关研究表明ER 中表达缺失显示ER13可能是潜在的肿瘤抑制基因，可能是治疗前列腺癌的理想目 标。 在前列腺癌细胞株与前列腺癌组织中广泛存在雌激素受体(ER)基因的甲基 化，甲基化的程度与肿瘤病理级别呈正相关，与ER基因的表达呈负相关，虽然在前 列腺增生组织中也存在ER甲基化，但明显低于前列腺肿瘤。在前列腺癌中，目前可 畿的一个使ER基因失活的原因就是ER基因启动区域的CpG岛甲基化，通过一些 尚不明了的机制导致ER基因转录失活。 为了研究前列腺癌细胞中雌激素受体13的表达情况与DNA甲基化酶抑制剂和 HDAC抑制剂的作用是否有关联，本实验通过DNA甲基化酶抑制剂5．杂氮．2’．脱 A(Trichostatin 亡情况；应用荧光实时定量PCR检测细胞中雌激素受体t3的表达情况，观察其是 否上调，为前列腺癌的临床治疗提供基础。 方法 一。材料与主要试剂 雄激素非依赖性前列腺癌细胞Dul45、PC．3和雄激素依赖性前列腺癌细胞 22RV购于中科院上海细胞库；5一杂氮一2’．脱氧胞营(美国Sigma公司)，睦吉_抑霉素 根)，Master-mix(天,．根)。 二。实验方法 l。细胞培养 次，取对数生长期的细胞进行实验。 2．淞T检测5-AZAC和TSA对前列腺癌细胞的影响 2 细胞的细胞生存率。细胞生存率(％)=(实验组A值-空白组A值)／(阴性对照组A值． 100％。实验重复3次。 空白组A值．)X 激素受体B的表达 RT-PCR试剂盒和SBRY-Green检测雌激素受体B的表达。 4．统计学分析 所有数据采用SPSSll．6软件包进行处理，取p0．05具有统计学意义。 结果 范围内随着剂量的增高，前列腺癌细胞生存率降低的越明显；5-AZAC和TSA联 合作用时前列腺癌细胞的生存率最低。 ER ER