神经干细胞移植延缓失神经肌萎过程中突触形成及其功能实验研究.pdfVIP

目 录 中文摘 要 一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一 1 英 文 摘 要 一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一 3 前 言 一 6 第 一 部 分 神 经干 细 胞 体 外培 养扩 增 ，体 内移 植 后 延 缓 失神 经肌 萎 的作 用-一 n 实验 一 大 鼠胚 胎 脊髓 神 经干 细 胞 的提 取 、体 外 培 养 及 分 化 一 12 实验 二 神经干 细 胞 体 内移 植 、存 活 、分化 及 延 缓 失神 经 肌 萎 的作 用一 20 第 二 部 分 神 经干 细 胞 移 植 后 与靶 肌 肉形 成 新 突触 过 程 的实验 研 究一 37 实验 一 移 植 神 经 干 细 胞 与 失神 经 支 配 靶肌 肉形 成 突 触 的形 态 学研 究一 38 实验 二 移 植 神 经 干 细 胞 与 失神 经 支 配 靶 肌 肉形 成 突 触 的功 能 学 检 测 一 47 第 三 部 分 宿 主 再 生 神 经 轴 突 与 移 植 神 经干 细 胞 形 成 突 触 的实验 研 究 全 文 小 结 主 要 创 新 点一 73 综 述 一 74 附 录 一 85 致 谢 一 86 中文 摘 要 神 经干 细 胞 移 植 延 缓 失神 经 肌 萎 过 程 中突触 形 成 及 其 功 能 的实验 研 究 中文 摘 要 第 一 部 分 神 经 干 细 胞 体 外 培 养 扩 增 ，体 内移 植 后 延 缓 失神 经 肌 萎 的作 用 目的 验 证胚 胎 脊髓 神经干 细 胞 的提 取 、体 外 培 养 和 增 殖 方 法 ，研 究神 经 干 细 胞 移 植 到损 伤 的外周 神 经 后 ，延 缓 失神 经 肌 萎 的效 果 。 方 法 取 孕 10一12 天 的 SD 大 鼠，通 过 机 械 吹打 法 提 取 脊髓 神 经干 细 胞 、 以无 血 清 限定性 培养 基 进 行 培 养 ，扩 增 及 纯 化 得 到 大 量 增 生 的神 经 干 细 胞 ， 以神 经 干 细 胞 特 异性 抗 体 N est in 进 行 鉴 定 ，将 神 经 干 细 胞进 行 体 外 分 化 ，通 过 特 异性 抗 体 染 色 检 验 其 分化 为神经 终末 细 胞 的能力 。传 2一3 代 后 ，将 扩 增 的神 经 干 细 胞 球 分 散 成 单 细 胞 悬 液 并调 整 密度 为 l扩/u1 ，备用 。制 作 胫 神 经 切 断 ，小腿 三 头肌 失神 经 支 配模 型 ，以微 量注射 器 移植 106/ul x sul 干 细 胞 悬 液 至 切 断 的胫 神 经远 端 ; 设立对 照 组 ，仅移 植 5u l 神 经干 细 胞 培 养 液 ，每 组 各 24 只 。分 别 于 术 后 3 月 ，5 月和 7 月取材 ，每 次 8 只 ，分 别观 察 移 植 神 经 干 细 胞 在 体 内存 活 及 分 化 成 为神 经 元 的情 况 ; 测 量 三 头肌 湿 重 及 肌 纤 维 横 截 面 积 维 持 率 ，验 证 神 经 干 细 胞 移 植 能 否 延 缓 失 神 经 支 配 骨 骼 肌 的萎 缩 及 其程 度 。 结 果 利 用机 械 吹打和 无 血 清 限定性 培 养 基 可 以得 到 大量 的脊髓 神 经干 细 胞 ，得 到 的神 经 干 细 胞 可 以在 体 外 大 量 扩 增 并 分 化 为 多种 神 经 终末 细 胞 ，证 明取 得 的神 经 干 细 胞 活性 良好 ; 神 经 干 细 胞 移 植 后 3 、5 、7 月取 材 及 免 疫 组 化