嗜麦芽窄食单胞菌耐药及传播机制分子流行病学研究.pdf

中文摘要 嗜麦芽窄食单胞菌耐药及传播机制的分子流行病学研究 摘 要 目的：嗜麦芽窄食单胞菌(stenotrophomonas 存在于自然界，在污水、自来水、土壤、人类体内均有寄居，医院环境如 透析装置、氧气湿化罐、血压计、人工呼吸装置、通气管道、医务人员皮 肤等也都能分离到该菌。嗜麦芽窄食单胞菌为条件致病菌，由于其致病力 低，临床上一直未引起重视。近年来，随着广谱抗生素和介入性诊疗技术 的广泛应用，该菌感染率不断上升，已成为继铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆 菌之后的又一重要非发酵革兰阴性杆菌，它的临床致病性越来越受到重 视。嗜麦芽窄食单胞菌作为院内感染病原菌，在医院环境中的传递模式目 前尚不清楚，分子流行病学是调查菌株间流行关系的有力工具，在分子分 型方法中，脉冲场凝胶电泳(PFGE)被认为是基因分型方法中的金标准， 因此应用PFGE调查嗜麦芽窄食单胞菌分子流行病学特征，必将揭示菌株 在医院内的传播方式，为控制其流行和传播提供更为有效的措施。 嗜麦芽窄食单胞菌具有外膜低渗透性，抗生素难以通过细菌外膜进入 细胞内以及泵出机制等，故对多种抗生素呈天然耐药性。此外，该菌可产 霉烯类药物在内的多重耐药性。临床实验室标准委员会(CLSI)把复方磺 胺甲嗯唑作为治疗嗜麦芽窄食单胞菌的首选药，尽管复方磺胺甲嗯唑体外 药敏实验抑菌效果敏感，但临床应用很快产生耐药性，其他药物如左氧氟 沙星单独应用也易产生耐药，因此推荐联合用药，但是关于联合药敏的抗 菌效果体外报道不一，国内未见喹诺酮类抗生素联合B内酰胺类抗生素对 嗜麦芽窄食单胞菌体外联合效应的报道。 近年来耐复方磺胺甲嗯唑嗜麦芽窄食单胞菌的报道逐渐增多，但耐药 比率报道不一，大概在215％，总体上正表现为逐年增高的趋势。有关 嗜麦芽窄食单胞菌耐复方磺胺甲嗯唑的机制国外正处于研究的热点，已有 研究认为I类整合子增强嗜麦芽窄食单胞菌对复方磺胺甲嗯唑的耐药性， 整合子作为可移动的基因，可以通过质粒或转座子传播，成为目前细菌耐 药机制的研究的热点，但是国内未见有关嗜麦芽窄食单胞菌对复方磺胺甲 中文摘要 嗯唑耐药机制的报道。整合子通过整合酶的作用可以整合自然界中的耐药 基因，被整合的基因盒通过整合子广泛传播，成为细菌耐药的重要机制。 嗜麦芽窄食单胞菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性被认为是固有耐药，目前 发现的两个耐药基因都位于染色体上。整合子携带的耐氨基糖苷类基因盒 已经在沙门菌属和假单胞菌属中有报道，但是未见有关整合子携带的基因 盒导致嗜麦芽窄食单胞菌耐氨基苷类的报道。 嗜麦芽窄食单胞菌作为一种重要的医院内病原菌，消毒和灭菌是控制 其引起医院感染的重要手段。随着消毒剂的广泛使用，由于细菌长期暴露 于浓度日渐增高的消毒剂环境中，逐渐产生染色体或质粒的变异，所获得 遗传物质编码的耐药性可得以稳定遗传，从而引发严重的临床感染。细菌 对消毒剂的抗性机制研究不多，抗性机制尚不清楚。 因此本研究旨在通过分子流行病学的手段，揭示菌株在医院内的传播 方式；探讨嗜麦芽窄食单胞菌对复方磺胺甲嗯唑和氨基糖苷类抗生素的耐 药机制，明确整合子在嗜麦芽窄食单胞菌耐药性传播中的重要地位；探讨 嗜麦芽窄食单胞菌对消毒剂的耐药机制及传播机制；并通过联合药敏的手 段旨在探索新的治疗方案，为控制嗜麦芽窄食单胞菌在医院内的出现和传 播提供充分有力的理论依据。 株嗜麦芽窄食单胞菌的临床相关资料，探讨临床感染的相关危险因素。 采用脉冲场凝胶电泳技术对18株连续临床分离株和8株耐消毒剂的 one软件分析同源性，条带 菌株的染色体进行基因分型，并应用quantity 相关性90％以上的被认为同一基因亚型。 采用微量肉汤稀释法检测8种抗生素对165株嗜麦芽窄食单胞菌的最 小抑菌浓度；采用棋盘格稀释法，分别测定头孢他啶与左氧氟沙星、头孢 哌酮／舒巴坦与左氧氟沙星联合应用时最小抑菌浓度(MIC)，并根据公式 计算部分抑菌浓度指数(FIC)，根据FIC指数判断是否有协同效应。 应用基因扩增技术扩增s ull，intl，GGC阳’，)．I，口口cf，6’)．刀， ant偿Ⅳ)．，等基因。扩增阳性产物测序并与G