解脲脲原体及其生物群类别与盆控炎相关性研究.pdfVIP

中 文 摘 要 前 言 解脉脉原体(Ureaplasmaurealyticum,Uu)是成人泌尿生殖道 的一种常见的寄生微生物，尤其是育龄期女性，同时也是泌尿生殖 道感染的重要病因之一。 底年人中感染U。主要由于性接触所致，在国外，已将U。感 染列为一种新的性传播疾病(SexuallyTransmittedDisease,STD)， 而STD最为严重的合并症之一是盆腔炎(PelvicInflammatoryDis- ease,PID)，即微生物从阴道、宫颈上行进人子宫内膜、输卵管及 (或)邻近组织而引起的临床综合征，是导致不孕、异位妊娠、慢性 盆腔疼痛、盆腔粘附性疾病的主要病因。目前国内外对Uu的研 究仅限于非淋菌性尿道炎、不孕、流产和早产等，尚未见到Uu在 PID中的致病相关性的确切报 于Uu感染与PID均可导致 不孕、异位妊娠等，故探讨Uu PID的关系对PID防治具有 重要意义。 材料 与方法 1.研究对象 本实验所用PID患者标本是本实验室从事“欧盟基金资助项 目”研究中采集，按照WHO推荐的PID诊断标准选择中国医科大 学附属一、二院妇科门诊PID患者100例(1999.7一2000.12)，年 龄20-56岁，平均32.7岁;在沈阳市经济开发区选择100名已婚 健康女性(2000.5-2000.10)作为对照组，经问诊和妇科体检，无 任何不适主述及异常体征，年龄21一44岁，平均29.2岁。 ·1 · PID诊断标准:单/双侧下腹痛和附件压痛，可伴有阴道分泌 物增多、白细胞计数10x10/L以上、体温38℃以上;除外月经不 规则、近期有分娩史、流产史、腹部肌紧张、反跳痛和阴道出血者。 2.Uu标准株 Uu国际标准株I一14血清型由本院皮肤性病科实验室惠赠， 经传代后，置一70℃冰箱保存。 3.实验方法 3.1标本采集 PID患者及对照组接受妇科检查时，先上阴道窥器，用无菌棉 拭除去宫颈口表面的粘液，取另一支棉拭插人子宫颈内I一2cm, 转动，停留20一30秒，取出后于一20℃冰箱保存。 3.2Uu检测 3.2.1DNA模板的制备: 将冻存的宫颈拭子放置达室温，用1ml的无菌生理盐水充分 洗脱棉拭子，贴壁挤出棉拭子中的水分，室温静置5一10分钟，取 上清夜300泌加人1.5ml的Eppendorf管中，14,000rpm离心5分 钟，弃上清。沉淀中加人50闷裂解缓冲液，充分震荡混匀后， 100℃水浴15分钟，14,000rpm离心5分钟，取4闪上清液为反应 模板进行扩增。 取出冰箱中保存的Uul一14型标准株，室温解冻后，取300闪 培养液进行上述操作，提取Uu标准株的模板。 3.2.2PCR扩增 所采用反应体系共26闪，其中10xbuffer2.5闪,2,5mmoVL dNTPI闪，50pmol/L的引.物对UMS一UMA1闪,DNA模板4p,1，耐 热DNA聚合酶0.75V，用超纯水补至26闪，加人50闪液体石蜡， 放人PCR扩增仪中进行扩增反应，94℃预变性5分钟，9490, 559C,72℃各45秒，共进行35个循环，最后在72℃延伸5分钟。 3.2.3结果判定 ·2 · 一一一一一一--一，~， 取10闪扩增产物加人2%琼脂糖凝胶样品孔中(含1N,g/ml 澳化乙锭)，室温，加电压2V/cm于0.5xTBE缓冲液中电泳1.5 个小时，然后在透过式紫外灯上观察结果并照相，出现403bp或 448bp特异性扩增条带为阳性。 结 果 1.用UMS125和UMA226做引物，PCR扩增Uu1一14型标准 株，得到的产物片段长度能区分Uu的2个生物群。Uuparvo生物 群的4个血清型(1,3,6,14