醛固酮合酶基因多态性与老年原发性高血压的关系.docVIP

醛固酮合酶基因多态性与老年原发性高血压的关系 作者：彭慧 胡晓军 陈苏 李峰 晏凯利 陈娟 涂远超 【摘要】 　　目的 探讨醛固酮合酶（CYP11B2）基因344C/T多态性与老年原发性高血压（EH）的相关性。方法 以人群为基础进行老年人EH病例对照研究，应用PCRRELP技术对289例武汉地区汉族老年人的CYP11B2基因344C/T多态性进行分析。结果 武汉地区汉族老年人群CYP11B2基因344C/T多态性以TT和CT为主要基因型，C等位基因较少见。CYP11B2基因344C/T多态性与老年人EH有相关性(Plt;0.05)。结论 武汉地区汉族老年人群CYP11B2基因344C/T多态性与EH存在相关性，老年高血压人群携带CC+CT基因型频率较高。 【关键词】 高血压;醛固酮;基因;老年人 原发性高血压（EH）是常见的心血管疾病。作为肾素血管紧张素醛固酮系统（RASS）的重要成分醛固酮在高血压的发生、发展中起着重要的作用。EH是一种多基因疾病，候选基因法是研究EH发病机制的重要方法之一。本研究旨在探讨武汉地区老年汉族人醛固酮合酶（CYP11B2）基因344C/T多态性的特点及其与EH的关系。 　　1 对象与方法 　　1.1 研究对象 　　2006年8月至2008年11月在我院体检者及部分住院患者。 EH组纳入标准：符合1999年世界卫生组织和国际高血压联盟（WHO/ISH）高血压诊断标准，汉族，年龄60～87岁。排除标准：肝肾疾患、心血管疾病（不包括EH）、继发性高血压。148例EH患者，其中男78例，女70例。对照组：经检查（临床体检、静息心电图、胸片以及血、尿常规正常）排除冠心病、脑血管病、糖尿病及肾脏疾患，收缩压＜140 mmHg以及舒张压＜90 mmHg，共141例，男76例，女65例，年龄60～84岁。两组中，除血总胆固醇有显著差异外，其余观察指标无显著差异。见表1。表1 两组一般资料及生化指标的比较（略） 　　1.2 方法 　　1.2.1 外周动脉血压的检测 　　被检者在安静环境下休息5～10 min，取坐位，使用汞柱式血压计测量右上肢肱动脉血压。以非同日3次测量值的均值为所得血压值。 　　1.2.2 基因组DNA的提取 　　采集空腹静脉血3 ml，加入2%乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝，采用商用提取人外周血白细胞DNA试剂盒提取基因组DNA。 　　1.2.3 PCR扩增及其产物检测 　　参照Kupari等〔1〕使用的引物，上游序列5′CAG GAG GAG ACC CCA TGT GAC3′，下游序列5′CCT CCA CCC TGT TCA GCCC3′。PCR反应体系：10×PCR缓冲液(加Mg2+)2.5 μl,引物各1 μl,10 mmol/L dNTP 1 μl,1 U Taq酶,DNA模板1 μl，加灭菌去离子水至总体积25 μl。PCR扩增条件：94℃预变性5 min，继35个循环进行扩增（94℃变性1 min，68℃退火1 min，72℃延伸1 min），最后72℃延伸5 min。PCR产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定。 　　1.2.4 DNA多态性分析 　　限制性酶切反应体系： PCR产物10 μl，HaeⅢ内切酶10 U，10倍缓冲液2 μl，加灭菌去离子水至20 μl。酶切条件37℃ 2～3 h，酶切产物经2.0%琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下观察电泳带并照相。 　　1.3 统计学处理 　　应用SPSS13.0统计软件分析，计量资料采用x±s表示。基因型和等位基因频率用基因计数法，等位基因频率比较及检验基因型频率与HardyWeinberg平衡定律符合程度，均用χ2检验。组别间比较采用t检验或χ2检验。 　　2 结果 　　2.1 两组CYP11B2基因 　　344C/T多态性频率分布特点 PCR产物长537 bp。CYP11B2基因344位点可发生胸腺嘧啶(T)与胞嘧啶(C)的互换,即T344C。344C等位基因有HaeⅢ酶切位点，而344T等位基因无该酶切位点，所以，TT型酶切片段为273 bp,CC型为202 bp，CT型酶切后产生273和202 bp片段，各基因型均含有多个小片段。见图1。结果表明，武汉地区汉族老年人CYP11B2基因344C/T多态性以TT和CT基因型占优势，经HardyWeinberg遗传定律检验，达到遗传平衡，具有群体代表性（χ2=0.003，Pgt;0.05）。 　　2.2 两组CYP11B2基因 　　344C/T多态性分析 由于CC基因型在研究对象中