第四章1内分泌系统-体外分析技-6.pptVIP

第四章 体外分析技术（in vitro assay） 目的要求： 掌握:放射免疫的基本原理 熟悉:放射免疫的临床应用。 了解:放射免疫的必备条件、 质量控制、体外配体结合分 析的种类及方法。 第一节放射免疫分析radioimmunoassay RIA 原理 *Ag +Ab←─→*Ag-Ab + *Ag 　　　　 + 　 Ag ↑↓ Ag-Ab + Ag 1.一定量的*Ag和 Ab 2. *Ag和Ag的总量大于Ab上的有效结合位点时， 3.*Ag-Ab的形成量随着Ag量的增加而减少，呈反比关系。 (二) 标准曲线 (standard carve) 1.加入一定量*Ag和 Ab 100μl 2.加入一定量Ag：100μl 病人1 ?ng 100μl 病人2 ?ng 100μl 病人3 ?ng 100μl 3.分离 测量结果 二、 必备条件 特异性抗体 1.亲和力（affinity） 2.抗体的特异性（specificity） 3.抗血清滴度(antiserum titer) 一般以B%为30～50%的抗体稀释度为最佳稀释度 二、 必备条件 标记抗原（radionuclide labeled antigen，*Ag） 1.标记抗原包括: 抗原(纯度要高)。 放射性核素　主要有125I、3H。 2.对标记抗原的要求（1）比活度（specific activity）（2）免疫活性（immune activity）　（3）放化纯度(radiochemical purity)　（4）便于放射性测量（radionuclide　counter）　 二、 必备条件 标准品 1.应选用纯度高的不含杂质的抗原做标准； 2.采用化学结构、免疫活性都与被测抗原一致的抗原做标准； 3. 标准定量一定要精确。 二、 必备条件　 分离技术 1.双抗体法（double antibody method）　 2.沉淀法(precipitation method) 也称PEG法　 3.双抗体法＋沉淀法（double antibody method＋ precipitation method）。 4.吸附法(adsorptive method)　 5.固相法(solid phase method) 测量仪器 测量仪器 三、 测定方法 1. 加样　 2. 孵育　 3. 分离　 4. 测量　 5. 数据处理　 四、 主要技术指标 （一） 精密度（precision）　又叫重复性，是对已知的同一样品重复测定结果的一致程度 1.用变异系数（CV）来表示　批内CV＜5%，批间CV＜5～10%。 2. 反应误差关系（RER）　用以反映整批实验误差的综合指标，RER应＜0.04。 3. 精密度图(precision profile)　常用的精密度图是以CV为纵坐标，相应的剂量为横坐标的反应曲线，按实验要求，通常采用CV≤10% 四、 主要技术指标 (二) 准确度(accuray)　 指测定值接近“真值”的程度。 用回收率来判定。 回收率=测定值/真实值X100%。 一般要求达到90～110% 四、 主要技术指标 （三） 灵敏度(sensitivity)　 指可检出的最小浓度 四、 主要技术指标 (四） 特异性(specificity)　 用交叉反应来判断。 交叉反应（cross reaction）越小， 特异性越好。 四、 主要技术指标 （五） 可靠性　 又称健全性(perfecty)， 是指被测物与标准品的免疫活性是否相同的指标。 借助标准曲线与样品稀释曲线的平行性分析来判断方法的可靠性，平行性好即可靠性好。 五、 质量控制 1.最高结合率（B0%）　 要求最大结合率在30-50%。 2.非特异结合率（NSB%）　 应＜5%～10%。 3.标准曲线直线回归的参数　 要求a、b稳定，r ＞0.99。 4.ED25，ED50，ED75标准曲线的结合率在25%，50%，75%时对应的抗原浓度值，它反映标准曲线的稳定性，有助于批间结果的比 5.反应误差关系（RER）： 是评价RIA整批误差的指标，应＜4%。 五、 质量控制 6.质控图有下列情况之一者， 其结果应予舍弃： ①三种QCS有一个测定值＞3 S。 ②三种QCS中在同一方向上有两种＞2 S。 ③三种QCS均在同一方