禽流感病毒NS1蛋白抗原表位不同筛选方法差异分析.pdf

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2017-09-07 发布于安徽
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IIII l llll1 11 IIIIII il ■ 18 目录 }Y22960 摘孽罨…………………………………………………………………………………………………………………………．I 英文摘要………………………………………………………………………………………．．IlI 1弓I言…………………………………………………………………………………………………………………………．1 1．1禽流感的研究现状………………………………………………………………………．1 I．I．1 AI病原及流行病学………………………………………………………………………．1 I．1．2AIV基因结构及编码的蛋白…………………………………………………………．2 1．1．3 AI检测方法的研究进展………………………………………………………………．3 1．2单克隆抗体(McAb)技术………………………………………………………………6 1．2．1McAb技术概述………………………………………………………………………．6 1．2．2抗原表位的研究……………………………………………………………………………．6 1．3抗原表位筛选方法的研究进展……………………………………………………………6 1．3．1噬菌体展示技术………………………………………………………………………．．6 1．3．2多肽芯片技术…………………………………………………………………………8 1．4研宄目的及意义…………………………………………………………………………．8 2材料与方法……………………………………………………………………………………．．9 2．1H5Nl亚型AIV NSI蛋白McAb的特性鉴定及纯化……………………………………9 2．1．1试验材料……………………………………………………………………………．．9 2．1．2试验方法………………………………………………………………………………9 2．2McAb的表位筛选………………………………………………………………………．．1l 2．2．1试验材料……………………………………………………………………………．1l 2．2．2试验方法………………………………………………………………………………ll 2．3验证筛选出的抗原表位…………………………………………………………………13 2．3．1试验材料……………………………………………………………………………l3 2．3．2试验方法…………………………………………………………………………………．14 3结果………………………………………………………………………………………………………………………．．16 3．1H5Nl亚型AIVNSl蛋白McAb的特性鉴定…………………………………………．．16 3．1．1Western blotting鉴定McAb……………………………………………………………………………16 3．1．2McAb亚型的鉴定……………………………………………………………………16 3．1．3腹水的纯化及SDS电泳鉴定………………………………………………．．16 3．2McAb的表位筛选………………………………………………………………………．17 3．2．1噬菌体筛选…………………………………………………………………………17 3．2．2多肽芯片筛选……………………………………………………………………………18 3．3筛选出的抗原表位的验证………………………………………………………………20 3．3．1 IFA鉴定表达产物与McAb的结合特性……………………………………………20 j 东北农业大学农学硕士学位论文 3．3．2点印记鉴定多肽与McAb的结合特性……………………………………………．．22 4讨论………………………………………………………………………………………………………………………。．