家蚕触角气味结合蛋白和化学感受蛋白基因克隆、序列分析及原核表达.pdfVIP

摘 要 mori 家蚕 BombyxLinaeus 是具有我国特色的重要资源昆虫，目自订有种桑养蚕的 农户遍布20余省，丝绸工业的年总产值已经超过1000亿元，2003年以向仲怀院士为首 的中国科学家在Science上首次报道了家蚕基因组框架图。该图覆盖了家蚕基因组95％ 的区域，获得了16948个完整的基因，7285个基因片段，该研究成果举世瞩目，为深入 丌展家蚕功能基因组研究奠定了基础。 鳞翅目昆虫除家蚕少数益虫外，很多是我国和世界各国农业和林业的重要害虫，如 何有效防治害虫但不污染环境是当前生产中的难题，破解家蚕气味结合蛋白和化学感受 蛋白在其嗅觉信号传递过程中发挥的作用，不仅可以指导蚕桑业的生产实践，也可以利 用这种家蚕模式生物的相关研究结果，积极应用于鳞翅目害虫的防治。而昆虫触角感受 器中的气味结合蛋白被认为是运输气味分子至嗅觉的受体，这些气味分子多为脂溶性的 小分子化合物，气味结合蛋白溶解并运输脂溶性气味化合物。是昆虫专一性识别外界气 味物质的第一步生化反应，对于昆虫与外界进行信息交流具有重要意义。基于此，本论 表达载体构建的研究。 001044029 了编码家蚕雌雄虫触角气味结合蛋白OBPs 登录号：PBPl：NM PBP2：AM403100 PBP3：NM一001083626GOBPl：NM一001044031 001043587CSP2：NM001043715CSP3： 和化学感受蛋白和CSPs 登录号：CSPl：NM 043599 043597 043600 1 3 CSP8： CSP7：DQ8555 NM一001 CSP4：NM一001CSP6：NM一001 CSPl2：NM一001098310 NM一001043604CSPlO：NM一001043727 1 CSPl5：NSPl6：NM 将其克隆至pGEM．TEasy载体，获得了OBPs和CSPs基因成熟蛋白阅读框序列。 利用凰朋跚在线分析工具对所得到序列进行分析，序列分析结果表明：家蚕OBPs 分子质量一般约为15～17kDa，N一木端有一段20个氨基酸左右的信号肽，序列中有6 个保守的半胱氨酸残基。这是大多数昆虫OBP的～个典型特征。在成熟蛋白上第40—60 X为任意氨基酸 ，这种结构可能与OBP结合脂溶性气味物质有关。6个半胱氨酸分别 交叉形成3个二硫键，即CysI CysIII、Cys 类分子质量约为13 约20个氨基酸残基，有4个保守的半胱氨酸位点，形成2个二硫键。家蚕CSPs家族与 其他昆虫CSPs家族具有相同的特点，约16～20个氨基酸的疏水N．术端，可编码信号 同源性，而且不同目、科昆虫之间也有较高的同源性。 将经Nco，和Xho 1双酶切的OBPs和CSPs序列片段和同样经双酶切的原核表达载 果表明，家蚕OBPs和CSPs均获得较好表达。 关键词：家蚕，气味结合蛋白，化学感受蛋白，序列分析，原核表达 ABSTRACT mori an resourceinsectwith Bombyxmori BombyxLinaeus isimportant Chinese householdswhoare the and the silkwormsdistribute20 present，thepeasant plantingmulberryraising inChina．Thetotalannual valueofsilk