细胞增殖和调控.pptVIP

CELL BIOLOGY;第一章 绪论 第二章 细胞基本知识概要 第三章 细胞生物学研究方法 第四章 细胞质膜与细胞表面 第五章 物质跨膜运输与信号传递 第六章 细胞质基质与内膜系统 第七章 细胞的能量转换 第八章 细胞核与染色体 第九章 核糖体 第 十 章 细胞骨架 第十一章 细胞增殖及其调控 第十二章 细胞分化与基因表达调控 第十三章 细胞衰老与凋亡 ;CELL CYCLE;细胞增殖(cell proliferation)的意义;第一节 细胞周期与细胞分裂;一、细胞周期(cell cycle)概述;从增殖的角度来看，可将高等动物的细胞分为三类： ①连续分裂细胞：如表皮生发层细胞、部分骨髓细胞。 ②G0期细胞:休眠细胞暂不分裂，但在适当的刺激下可重 新进入细胞周期。如淋巴细胞、肝、肾细胞等。 ③终端细胞：指不可逆地脱离细胞周期，不再分裂的细胞，又称不分裂细胞，如神经、肌肉、多形核细胞等。 G0期细胞和终末分化细胞的界限有时难以划分，有的细胞过去认为属于终末分化细胞，目前可能被认为是G0期细胞。;（二） 细胞周期中各个不同时期及其主要事件;DNA复制与组蛋白合成同步;Eucaryotic Cell Cycle ;1、脉冲标记DNA复制和细胞分裂指数观察测定法： 又称标记有丝分裂百分率法（percentage labeled mitoses，PLM）：对测定细胞进行脉冲标记、定时取材、利用放射自显影技术显示标记细胞，通过统计标记有丝分裂细胞百分数的办法来测定细胞周期。 2、流式细胞仪测定法（Flow Cytometry） 缩时摄像技术，可以得到准确的细胞周期时间及分裂间期和分裂期的准确时间。;有关名词： TG1：G1期的持续时间 TG2：G2期的持续时间 TS：S期的持续时间 TM：M期的持续时间 TC：一个细胞周期的持续时间 PLM：标记的有丝分裂细胞所占的比例 TDR：胸腺嘧啶核苷，是DNA的特异前体，能被S期细胞摄入，而掺进DNA中。通常使用的是3H或者14C标记的TDR。;测定原理（图13-2）： ① 待测细胞经 3H-TDR 标记后，所有 S 期细胞均被标记。 ② S 期细胞经 G2 期才进入 M 期，所以一段时间内PLM=0。 ③开始出现标记 M 期细胞时，表示处于 S 期最后阶段的细胞，已渡过 G2 期，所以从 PLM=0 到出现 PLM 的时间间隔为 TG2。 ④ S期细胞逐渐进入 M 期，PLM 上升，到达到最高点的时候说明来自处于 S最后阶段的细胞，已完成 M，进入 G1 期。所以从开始出现 M 到 PLM 达到最高点（≈100%）的时间间隔就是 TM。 ⑤ 当 PLM 开始下降时，表明处于 S 期最初阶段的细胞也已进入 M 期，所 以出现 LM 到 PLM 又开始下降的一段时间等于 TS。 ⑥ 从 LM 出现到下一次 LM 出现的时间间隔就等于 TC，根据 TC=TG1+TS+TG2+TM 即可求出 TG1 长度。 事实上由于一个细胞群体中 TC 和各时相不尽相同，第一个峰常达不到100%，以后的峰会发生衰减，PLM 不一定会下降到零，所以实际测量时，常以（TG2+1/2TM）-TG2 的方式求出 TM。;50;; 是指在自然过程中发生或经人为处理造成的细胞周期同步化。前者称自然同步化，后者称为人工同步化。 1、自然同步化 ①、多核体：如：粘菌、疟原虫。 ②、某些水生动物的受精卵：如海胆、海参、两栖类。 ③、增殖抑制解除后的同步分裂：如真菌的休眠孢子移入适宜环境后，它们一起发芽，同步分裂。;受精卵早期卵裂;（1）选择同步化： 人为地将处于不同时期的细胞分离开来，从而获得不同时期的细胞群体。 ①有丝分裂选择法：用于单层贴壁生长细胞。 M期细胞与培养皿的附着性低，振荡脱离器壁收集。 优点：操作简单，同步化程度高，细胞不受药物伤害。 缺点：获得的细胞数量较少（分裂细胞约占1%～2%） 。 ②密度梯度离心法：根据不同时期的细胞在体积和重量上存在差别进行分离。 M期细胞体积大，可用离心分离。 优点：方法简单省时，效率高。可用于任何悬浮培养的细胞。 缺点：对大多数种类的细胞并不适用。;① DNA合成阻断法：选用DNA合成的抑制剂，可逆地抑制DNA合成。 常用TDR双阻断法： 在细胞处于对数生长期的培养基中加入过量TDR（Hela 2mol/L；CHO 7.5mol/L）。S期细胞被抑制，停在G1/S交界处。 移去TDR，释放时间大于 TS 时，再次加入过量 TD