血液病毒核酸检测质量控制(深圳市血液中心).pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 弱阳性质控样本常见的失控原因 核酸提取中的随机误差。如核酸提取中的丢失、有机溶剂的去除不彻底、标本中扩增抑制物的残留等。 仪器的问题。如扩增仪孔间温度的不均一性、孔内温度与所示温度的不一致性等。 试剂的问题。如Taq酶和/或逆转录酶的失活、探针的纯度及标记效率和核酸提取试剂的效率等。 核酸检测质控中的质控规则 当阴性质控样本为阳性时,不管阳性率测定比值为何，均为失控，所有阳性标本须重新测定，并增加一倍阴性质控样本。 标本间交叉污染的概率计算 如果所有阳性结果的出现是连续性的，则可能存在标本间的交叉污染，即阳性样本污染了它邻近的阴性样本 室内质控的局限性 IQC可确保每次测定与确定的质量标准一致，但不能保证在单个的测定样本中不出现误差。比如:样本鉴别错误 样本吸取错误 结果记录错误等等！！ 上述此类误差的发生率在不同的实验室有所不同，且应均匀地分布于测定前、测定中和测定后的不同阶段。 结果的报告解释 根据说明书和质控结果判断结果的有效性 结果无效的样本重新检测 如果是混样检测，阳性结果应做拆分实验。 用室间质评结果改进实验室检测质量 IQC确保实验室室内测定质量的一致性，而EQA则提供将实验室测定情况是进行回顾性比较的数据。 EQA在质量保证中对IQC是一种补充作用。 室间质控标本应具备 样本特征与患者样本应尽量一致 样本浓度与试验的临床应用相适应 在样本发放的条件下稳定 不存在不可避免的传染危险性 EQA的整个过程 参加实验室能力比对评价 可以报名参加： 1.国际机构组织的实验室能力比对活动 例如澳大利亚国家参比实验室（每年三次） 2.我国卫生部临床检验中心（每年二次） 对检测结果进行认真分析，总结经验提高核酸检 测水平 血筛核酸检测实验控制环节 室间质评的结果分析 针对有问题的结果找出问题的原因 采取纠正改进措施 对下一次质评检测结果进行分析讨论，检查并进行进一步分析原因。 持续改进，持续提高。 实验室的结果分析 总 结 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 血液病毒核酸检测的质量控制 深圳市血液中心 曾劲峰 质量控制应贯穿检测过程始终 标本的采集 样品信息录入 检测全过程的控制 检测结果分析 核酸检测过程 * 分析后 采集容器 采集方式 保存运输 不合格样本： 脂血、溶血、样本量不足 样本 分析中 分析前 检测结果 纯化试剂 准备 仪器 维护 自检 准备： 质控 样本 试剂 前处理 混样 信息录入 扩增检测 结果分析 结果记录 核酸纯化 检测系统 试剂` 设备 质控品 检测试剂的准备 质控要点 标本的采集与储存 样本的制备----核酸纯化 试剂准备、加样 逆转录、扩增、检测 结果分析 报告解释 测定前质量控制 样本 实验室设施、仪器设备确认及管理 理想的检测试剂和操作方法 人员培训 建立科学、合理具有适用性的SOP文件 建立完善的操作SOP 常规操作的SOP应包括： 标本管理规定、试剂说明书、仪器设备的操作规程、检测报告发放、实验室生物安全控制的SOP等 根据实际工作建立SOP文件 各类作业指导书 关注采集、保存、运输的细节 运输条件 离心 采血管 第一步：标本的采集-采血管 无菌真空采血管 一、血清管 普通血清管 带分离胶的血清管 二、抗凝管 EDTA 2K或3K抗凝管 EDTA 2K抗凝间分离胶（PPT) 枸橼酸钠抗凝管 …… 标本的采集-采血管 需考虑的因素： 试剂要求： EDTA会螯合部分二价离子，PCR反应中需Mn2+或Mg2+ 混样设备/检测设备适用 运输要求 有分离胶更适合运输 4.使用前必须评估 结果重复性：PPT 建议 1、首先留取酶联免疫检测血样。 2、再留取核酸检测血样。 3、留取长期保存血样。 标本的采集留样方式 血液标本采集后，应尽量在4小时以内离心，以避免RNA的降解。 血液标本离心后，4 天内进行检测的可存放于2-8℃；如需长期保存的样本，3 个月以内存放于-20℃以下。3 个月以上置于-70℃以下。反复冻融不超过3次。 第三步：标本的运送 2-8°C稳定48hr 第四步：标本的接收、保存 确认标本数量 运输状态 标本状态：溶血、脂血 保存：血液标本离心后， 4 天内进行检测的可存放于2-8℃； 如需长期保存的样本， 3 个月以内存放于-20℃以下。 3