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第二章 中药化学成分研究方法 一、提取(extract) 1. 升华法 2. 水蒸汽蒸馏法—挥发油 水蒸汽蒸馏 3. 溶剂法 石油醚、苯、乙醚、氯仿、乙酸乙酯、 正丁醇、 丙酮、乙醇、甲醇、水 petroleum ether, C6H6 , Et2O, CHCl3 , EtOAc, n-BuOH, Me2CO, EtOH, MeOH,H2O 极性？亲酯性、亲水性？ 3. 溶剂法： （1）溶剂的选择 ◆ 石油醚：脱脂 ◆ 苯、乙醚、氯仿、乙酸乙酯： 甾类、萜和挥发油、生物碱、各种苷元 ◆ 正丁醇：苷 ◆ 乙醇、甲醇：蛋白、多糖以外的各类成分 ◆ 水：苷、生物碱盐、鞣质、氨基酸、蛋白、糖 a、煎煮 b、回流 c、连续回流（索氏提取，Soxhlets extraction） d、浸渍法 e、渗漉法 f、超声法 a、蒸馏 b、减压蒸馏c、旋转蒸发 d、薄膜蒸发 e、喷雾干燥 f、冷冻干燥 回流 连续回流 (索氏提取) (Soxhlets xtractor) 渗漉法 薄膜蒸发 二 分离(isolation ,separation) 1.溶剂法：溶解或两相溶剂萃取 2. 酸碱法：生物碱、有机酸、 3. 沉淀法： a、H2O + 醇：多糖、蛋白质 b、皂苷：醇溶液+ Et2O or EtOAc or Me2CO c、调pH：生物碱、有机酸、氨基酸 d、醋酸铅沉淀 e、鞣质（加生物碱、明胶） 4. 盐析法—黄连素 5. 制备衍生物法：生物碱（盐）、皂苷 （次级苷、乙酰化物等） 6. 透析法—蛋白及多糖纯化 7. 吸附法 8. 超临界流体萃取法 9. 色谱法 吸附法： 常用吸附剂：活性碳、硅藻土、硅胶、氧化铝、聚酰胺、大孔吸附树脂 除去叶绿素：大孔树脂RA，用EtOH洗脱，先洗出其他成分，叶绿素被吸附。 皂苷纯化：大孔树脂D101、HP-20、NKA，先用水 洗除糖等，再用稀EtOH洗下皂苷。 色谱法 ◆方法：TLC、柱色谱、纸色谱 ◆原理：吸附色谱、分配色谱、凝胶过滤色谱、离子交换色谱。 紫外下观察荧色空白黄连复方(三次)标准品 显色 纸色谱 ◆原理： 1. 吸附色谱 根据色谱机理不同分类，主要有4类。 1．吸附色谱（adsorption chromatogramphy） 用吸附剂对混合物中各成分的吸附性能不同，使各成分得到分离。 常用吸附剂: 硅胶、氧化铝: 均为极性吸附剂 聚酰胺: 氢键吸附剂 硅胶色谱 影响Rf值的主要因素 1. 吸附剂 2. 展开剂 (CHCl3-MeOH=9:1 or 8:2) 3. 化合物结构 烷烃、烯烃、醚、酯、酮、醛、胺、 醇、酚、酸。极性增加顺序.极性还和分子大小有关(多糖). 聚酰胺色谱 (6-胺基己酸聚合物) 主要用于分离酚类化合物 ★酚-OH越多吸附力越强，Rf值越小。 ★共轭双键越多Rf值越小。 ★酚-OH有内氢键时吸附减弱， Rf值变大。 ★苷: 酚-OH相同,糖越多Rf值越大。 聚酰胺 TLC Rf ? 2．分配色谱（partition chromatogramphy） 利用混合物中各成分在固定相和移动相中的分配系数不同而得到分离。有正相和反相分配两种。 正相分配色谱 支持剂：硅胶，溶剂系统：水饱和的正丁醇， 水为 固定相，正丁醇为移动相。 A、比较苦杏仁苷和野樱苷的洗脱顺序？ B、比较1,2 Rf值？ 1 2 反相分配色谱 反相硅胶：在硅胶表面键合长度不同的烷基（R），形成亲油表面而成。 ?SiOH + X-Si-R ? ?Si-O-Si-R + HX RP-2、RP-8、RP-18，烷基长度为乙基、辛基、十八烷基。 溶剂：H2O-MeOH、H2O-CH3CN 比较苦杏仁苷和野樱苷的洗脱顺序？ Rf值？ 4．离子交换色谱 利用混合物中各成分与离子交换树脂结合力不同而得到分离的色谱。 阳离子交换树脂（苯乙烯型树脂，磺酸