生物化学与分子生物学（四）21基因诊断与基因治疗.pptVIP

第二十一章 基因诊断与基因治疗 Genetic Diagnosis and Gene Therapy 本章内容 概述 基因与疾病 第一节 基因诊断(gene diagnosis ) 第二节 基因治疗(gene therapy) 教学要求 掌握基因诊断概念和特点；熟悉基因诊断的常用技术方法；了解基因诊断的应用。 掌握基因治疗的概念；了解基因治疗的基本程序和基因治疗的应用。 第 一 节 基 因 诊 断Genetic Diagnosis 二、基因诊断常用技术方法 限制性内切酶谱分析法 DNA限制性长度多态性(restriction fragment length polymorphism, RLFP)分析 等位基因特异寡核苷酸探针(allele specific oligonucleotide, ASO) 甲型血友病的基因诊断（连锁分析1） 甲型血友病的基因诊断（连锁分析2） （二）聚合酶链反应（PCR） （四）基因芯片技术 三、基因诊断的应用 遗传疾病 肿瘤 感染性疾病，传染性流行病 判断个体疾病易感性 器官移植组织配型 法医学中个体识别、亲子鉴定 第 二 节  基 因 治 疗Gene Therapy 基因治疗应用的条件 单基因缺陷的疾病 仅限于体细胞的基因治疗 靶细胞可从病人机体获取、培养，并进行遗传操作后回输病人体内 治疗效果大过对病人的危害 表达水平无需严格控制即可改善疾病，并且无副作用 人体的基因治疗计划必须经过证明符合严格的安全标准 二、基因治疗的基本程序 间接体内疗法（ex vivo） 治疗性基因的选择 基因载体的选择 靶细胞的选择 基因转移 外源基因表达的筛选 利用在体中的标记基因 回输体内 病毒载体 非病毒载体 体细胞 生殖细胞 间接体内疗法 直接体内疗法 * * 主讲教师 刘永明 基因变异致病类型 内源基因的变异 基因结构突变 基因表达异常 外源基因的入侵 特点 针对性强 特异性强 灵敏度高 适应性强 一、基因诊断的概念和特点 定义 利用现代分子生物学和分子遗传学的技术和方法，直接检测基因结构及其表达水平是否正常，从而对疾病作出诊断的方法。 （一）核酸分子杂交技术 × MstⅡ酶切位点(GCTNAGG) 5′ 3′ 正常基因 5′ 3′ 突变基因 1.15kb 1.35kb 镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析 + ﹣ 0.2kb 1.15kb 1.35kb 正常人 突变携带着 患者 镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析 放射自显影照片 RLFP分析法 5’ 3’ 引物1 引物2 99 bp 43 bp Bcl I 因子VIII 基因142 bp 片段 142 bp 99 bp 43 bp 异常带 先证者 胎儿 点突变（C to T） 5’ 3’ 3’ 5’ G 5’ 3’ 引物1 引物2 探针1 探针2 A 等位基因特异寡核苷酸探针（ASO） PCR/单链构象多态性分析 (single strand conformation polymorphism, SSCP) PCR产物变性后，经聚丙烯酰胺凝胶电泳，正常基因和变异基因的迁移位置不同，借此可分析确定致病基因的存在。 正常人 纯合突变 杂合突变 Leber 病患者 PCR/SSCP分析 + ﹣ DNA链末端合成终止法 （三）基因测序 DNA自动测序 采用荧光替代放射性核素标记是实现DNA序列分析自动化的基础。用不同荧光分子标记四种双脱氧核苷酸，然后进行Sanger测序反应，反应产物经电泳（平板电泳或毛细管电泳）分离后，通过四种激光激发不同大小DNA片段上的荧光分子使之发射出四种不同波长荧光，检测器采集荧光信号，并依此确定DNA碱基的排列顺序。 DNA自动测序结果举例 基因点突变分析 定义 早期是指用正常的基因整合入细胞基因组，以校正和置换致病基因的一种治疗方法。 目前广义上来讲是指将某种遗传物质转移到患者细胞内，使其在体内发挥作用，以达到治疗疾病目的的方法。 一、基因治疗的概念 基因治疗的基本方法 基因矫正 (gene correction) 基因置换 (gene replacement) 基因增补 (gene augmentation) 基因失活 (gene inactivation) 几种常见的基因失活技术 反义核酸技术 核酶技术 三链技术 干扰RNA技术 基因治疗的其他方法：如“自杀基因”的应用，基因疫苗等 *