16SrDNA的提取鉴定.docVIP

用16S rDNA方法鉴定细菌种属一、目的 1. 掌握16S rDNA对细菌进行分类的原理及方法； 2. 掌握DNA提取、PCR原理及方法、DNA片段回收等实验操作。 二、原理 随着分子生物学的迅速发展细菌的分类鉴定从传统的表型分类进入到各种基因型分类水平如(G+C)mol%、DNA杂交、rDNA指纹图、质粒图谱和16S rDNA序列分析等。细菌中包括有三种核糖体RNA，分别为5S rRNA、16S rRNA、23S rRNArRNA基因由保守区和可变区组成。16S rRNA对应于基因组DNA上的一段基因序列称为16S rDNA。5S rRNA虽易分析，但核苷酸太少，没有足够的遗传信息用于分类研究23S rRNA含有的核苷酸数几乎是16S rRNA的两倍，分析较困难。而16S rRNA相对分子量适中，又具有保守性和存在的普遍性等特点，序列变化与进化距离相适应，序列分析的重现性极高因此，现在一般普遍采用16S rRNA作为序列分析对象对微生物进行测序分析。rDNA鉴定细菌的技术路线： PCR的基本原理：必须已知部分序列设计出引物，10-30bp。 以此类推，呈几何级增长。一般进行25-35个扩增循环 DNA可扩增106~109倍。 三、实验步骤 （一）细菌基因组DNA提取 技术路线： 具体步骤： 1. 挑单菌落接种到10 mL 培养基中37℃振荡过夜培养。 2. 取 mL培养液到