水稻OsNHO1基因cDNA序列分离及表达分析_高志亮.docVIP

第 5 卷 第 1 期 2014 年 3 月  热 带 生 物 学 报 JOUＲNAL OF TＲOPICAL BIOLOGY  Vol． 5 No． 1 Mar. 2014  文章编号： 1674 － 7054（ 2014） 01 － 0030 － 06 水稻 OsNHO1 基因 cDNA 序列分离及表达分析  1， 1，  3 1， 1， 1，  1，2  （ 1． 海南大学 热带生物资源可持续利用重点实验室，海南 海口 570228； 2． 海南大学 农学院，海南 海口 570228； 3． 北京农学院，北京 102206）  摘  要： OsNHO1 是一种甘油激酶，受多种因素的诱导，在植物先天免疫反应中起着重要的作用。笔者采用 同源序列法，根据已报道的拟南芥 NHO1 基因序列结合水稻基因组测序结果，筛选水稻 OsNHO1 基因，采用 ＲT-PCＲ 获得水稻 OsNHO1 基因全长 cDNA（ 1 590 bp，529AA） ，并通过半定量 ＲT-PCＲ 方法分析 OsNHO1 基因 在 SA，PXO99 刺激下的表达模式，结果显示 OsNHO1 基因的表达受 SA，PXO99 的诱导，为进一步 研 究 OsN- HO1 的具体功能和作用机理奠定了基础。 关键词： 白叶枯病； 植物先天免疫反应； 非寄主抗性； OsNHO1 基因； 半定量 ＲT-PCＲ 中图分类号： Q 943． 2； S 511 文献标志码： A  非寄主抗性是植物界中广泛存在的植物防卫机制，它能使植物有效地察觉并逃避潜在的微生物。非 寄主激发子在非寄主抗性和引起可诱导的防御反应的早期阶段产生，PAMPs（ Pathogen-associated molecu- lar patterns） 是非寄主植物与病原物相互作用的主要诱导物［1］。目前有 2 种非寄主抗性的模型，一种模型 认为由于缺少真菌效应蛋白使 PMAPs 触发了植物的防御反应，从而产生持久抗性； 而另一种模型认为许 ［2］ 。研 究表明： 模式生物拟南芥对其非寄主假单胞菌的抗性主要是以鞭毛蛋白和其它病原菌相关分子模式激活 ［3］ 。LU 等［3］ 从 10 个 对 菜 豆 晕 斑 病 菌 （ Pseudo- monas syringae pv． phaseolicola） 非寄主抗性有所降低的拟南芥突变体中，筛选得到 nho1 突变系，并分离获 得 NHO1。NHO1 是一种隐性突变基因，编码甘油激酶，该酶属于 ATP 酶系（ 该酶系具有相似的空间结构， ［3 － 7］ 。 研究 发 现，在 病 原 物 相 关 分 子 模 式 触 发 的 免 疫 （ PAMP-triggered immunity，PTI ） 中，PAMP 能 激 发 NHO1 基因表达，NHO1 基因被认为是抵御多重复合非宿主病原菌 P． syringase 的关键基因［8 － 9］，具有对非 寄主病原菌的非特异抗性。在拟南芥对非寄主病原菌产生的“基因对基因”抗性中，NHO1 亦不可缺少，而 对于毒性假单孢菌，NHO1 似乎并没有起到任何抗性作用，说明毒性假单孢菌能利用某种特殊机制克服或 逃避这种抗性。有趣的是，研究还发现 P． syringae pv． tomato DC3000 携带的效应基因 avrB 能诱导而非 抑制 NHO1 基因的表达。avrB 激活了基因对基因的抗性，并通过作用于茉莉酸信号途径的上游或下游而 ［4］ 。 PTI 在水稻广谱抗病中也至关重要，但在 PTI 信号通路中发挥重要作用的基因还有待研究。通过同 源性分析，发现水稻中也含有类似于拟南芥 NHO1 的基因，该基因功能尚缺乏研究。笔者在充分借鉴模 式植物现有研究的基础上，结合水稻基因组测序数据，从水稻基因组中候选了水稻 OsNHO1 基因，经 ＲT- 收稿日期： 2014 － 02 － 26 基金项目： 转基因生物新品种培育重大专项 （ 2009ZX08009 － 41B） ； 国家自然科 学 基 金 （） ； 海 南 省 重 大科技项目（ ZDZX2013023 － 2） ； 公益性行业科研专项（ 201403075） 作者简介： 高志亮（ 1987 － ） ，男，研究方向： 植物抗病分子育种． E-mail： 924514237@ qq． com 通信作者： 陈银华（ 1976 － ） ，男，教授，博士生导师． E-mail： yhchen@ hainu． edu． cn 第 1 期  高志亮等： 水稻 OsNHO1 基因 cDNA 序列分离及表达分析  31  PCＲ