p53基因克隆表达及其对HL-60肿瘤细胞的诱导凋亡作用.pdfVIP

上海师范失掌第4页共54页 摘 要 3基因 背景：Lane等在研究sV一40T抗原与细胞蛋白相互作用时发现p53蛋白。wtp5 在细胞正常生长过程中起着重要的调节作用，明显抑制细胞的转化生长．一旦p 5 种癌变。在已检测的人类肿瘤中，50％以上含有p53基因突变．p3蛋白被认为是 细胞生长过程中主要的负调控因子，p53调控细胞生长的功能以及肿瘤发生的密 切关系使得p53一直处于细胞学与肿瘤研究的“热”点位置。国内外的研究大多 t 集中在通过载体(如病毒载体从V)将wp53基因转入到肿瘤细胞中，恢复wtp53 蛋白的抑瘤功能。但导入的载体存在不安全性，而利用基因工程体外合成wtp53 蛋白，并用磁性纳米粒子修饰后直接作用于肿瘤细胞并探讨其诱导凋亡的机制， 国内外尚无此报道。目的：体外合成获得野生型p53蛋白(wtp53蛋白)，并观察 wtp53蛋白对人早幼粒自血病细胞诱导凋亡作用，旨在阐明wtp53蛋白的抗肿瘤机 wtp53蛋白，用sDS—PAGE分离鉴定，再通过GsT亲和层析柱纯化。得到较纯的蛋白， 并通过磁性纳米粒子表面修饰后用四氮唑蓝比色法(MTT法)及集落形成法观察 wtp53蛋白对HL一60细胞生长抑制以及对其生长周期的影响，应用流式细胞术、透 射电镜、荧光显微镜等方法检测HL一60细胞凋亡的发生。结果：l_IPTG诱导后的 大肠杆菌与对照组比较出现明显的53kD蛋白带。2．修饰过的p53蛋白对HL一60细胞 的生长有明显的抑制作用，与对照组相比有显著性差异(p0．01)，且抑制率与 用药剂量及时间呈显著性正相关，在剂量为0～100pg／m1范围内，抑制率随剂量 的增加而增加。3．p53蛋白诱导HL一60细胞发生凋亡，电镜下观察到HL一60细胞细 胞核固缩，核内染色质浓缩、凝聚，紧靠在细胞核膜边沿，形成新月形或环状结 构等典型的凋亡细胞的形态变化及凋亡小体。流式细胞仪可检测到．p53蛋白 出现在细胞质和细胞核内。 结论：这种原核细胞表达的人wtp53蛋白具有天然的p53蛋白的特性，在体 外分析时发现p53蛋白能抑制HL一60细胞生长并促使其发生凋亡。 本实验为寻找新型抗肿瘤基因工程药提供可靠的数据和资料 关键词： p53蛋白；克隆表达；磁性纳米粒子；凋亡 上海师范大掌第5页共54页 aIld ofhumallfusion aIld ClonillgeXpressionp53 proteiIl its onHL一60tumorcells apoptosis ofa tumour Abstract：background：Thep53protein，theprOduct suppressor isa ofcell and s． gene， keyregulatorgrowth，differentiationapoptosl It isabletoinduceatransientcell arrestandterminalsenescence． cycle Thedeletionandmutationof willbe a11 p53protein carcinogenic．Among kindsofvarious causedthe mutation。丁husthe cancers，50％isby p53 research has attractalotofattentionthese Onp53proteinalways