p53第72位密码子Arg%2fPro及PIN3多态性与上皮性卵巢癌易感性关联研究.pdf

中文摘要 性卵巢癌易感性的关联研究 摘 要 目的：卵巢癌是妇科常见的恶性肿瘤，由于卵巢癌迄 今仍无完善的早期诊断方法，晚期病人疗效不佳，故其死 亡率居妇科恶性肿瘤的首位，成为妇科肿瘤中威胁最大的 疾病。p53基因是大家公认的抑癌基因，在人类50％以上 的肿瘤组织中均发现了p53基因的突变，而在妇科肿瘤中 以卵巢癌p53的突变发生率最高。p53基因部分多态性位 点影响p53蛋白的结构与功能，从而与肿瘤的易感性有 关，目前研究发现，其中有三个多态性位点与肿瘤的发病 有关，位于第72密码子BstUI切点区的限制性酶切位点 (Arg／Pro)，第三内含子区16bp插入／缺失多态性 (PIN3)，第六内含子的MSP I的限制性酶切位点。已有 研究表明，p53第三内含子与第六内含子的多态性具有强的 连锁不平衡，故本研究选用第72位密码子与第三内含子作 为研究位点。本研究旨在探讨p53第72位密码子Arg／Pro 及PIN3多态性在我国北方汉族女性卵巢癌人群中的分布 情况，为卵巢癌的预测及发病机理提供依据，并研究其与临 床特征的相关性。 方法：本实验采用病例．对照研究方法对卵巢癌与p53 第72位密码子Arg／Pro及PIN3多态性的相关性进行研究。 学附属第四医院进行手术治疗与化疗的北方籍汉族患者 中文摘要 (化疗忠者亦为于我院进行手术治疗后追加化疗的卵巢癌 患者)。所有卵巢癌患者均经组织病理学诊断为上皮性卵 巢癌。根据病理类型分组包括浆液性卵巢癌72例，黏液性 卵巢癌9例，宫内膜样癌43例：采用国际妇产科联盟 (FIGO)的临床病理分期方法，将卵巢癌分为I、II、 III、Ⅳ期，将I、II期定义为早期，III，Ⅳ期定义为晚期， 早期卵巢癌40例，晚期卵巢癌84例。128例正常对照为同 一地区的健康汉族女性个体，家族中无恶性肿瘤患者。卵 巢癌患者组与对照组的一般情况通过问卷调查形式，包括 年龄，孕次，产次，初潮年龄等。在征得本人或其家属同 意后，无菌操作下采集新鲜外周静脉血5ml，采用蛋白酶 K一氯化钠盐析法提取基因组DNA。 根据第72密码子的Arg／Pro核苷酸序列合成特异性引 物，分别利用两对引物做两管平行PCR扩增Arg与Pro两 个等位基因。扩增产物经2％的琼脂糖，在1XTAE缓冲液 DNA 中电泳，同时上样阴性对照，并选择100 marker平 bp 行电泳，溴化乙锭(EB)染色，在紫外灯下观察扩增结 果。Arg纯合子在141 bp处产生一个片段，Pro纯合子在 177 bp处产生一个片段，Arg／Pro杂合子产生141bp和 177bp两个片段。 根据第三内含子序列合成特异性引物，对含有16bp重 复序列的第三内含子进行扩增。扩增产物在l×TBE缓冲液 中经12％聚丙烯酰胺凝胶电泳，银染后观察结果。电泳片 为A’／A、基因型(16bp纯合插入)，而两条带都存在者为 A／A、基因型。计算组间基因型、各等位基因频率，基因型 中文摘要 及等位基因频率显著性检验分别用2×2、2×3行×列表x2 检验。 结果：(1)卵巢癌组和对照组的均衡性检验。健康对照 组与病例组年龄，初潮年龄、孕次，产次构成无显著差异 (P0．05)，说明病例组与对照组具有良好的可比性。(2) 上皮性卵巢癌患者及健康对照组p53第72位密码子 Arg、Pro等位基因频率在两组间无显著性差异 (P0．05)。将卵巢癌组按照病理类型分组，浆液性卵巢癌 和宫内膜样卵巢癌分别与正常对照组相比未发现该多态位 点基因型频率与等位基因频率有显著性差异(PO．05)。将卵 型分布在早期与晚期卵巢癌问有显著性差异(P=0．013)， Arg、Pro等位基因频率在两组间比较差异有显著性 Pro／Pro)与Arg／Arg基因型频率在两组间比较差异亦有显 著性(P=