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RNA干扰技术应用于淋巴榴,白血病肿瘤基因治疗的初步研究
RNA干扰技术应用于淋巴瘤/白血病肿瘤基因治疗
的初步探讨
专业:病理学与病理生理学
博士研究生:古聪敏
导师:林汉良教授
摘 要
淋巴瘤/白血病是淋巴造血系统的常见恶性肿瘤,在我国恶性淋巴瘤发病率占恶性
肿瘤总数3—4%,居恶性肿瘤第11位;白血病年发病率2,76/10万,是青少年最常见
的恶性肿瘤。淋巴瘤,白血病无论从发病机理到诊断分型都非常复杂.探讨其发病机制,
寻找特征性基因治疗靶点是近年来研究的热点。
Survivin是凋亡抑制蛋白家族(inhibitorofapoptosisproteins,IAPs)成员之一,也是目
前为止所发现的抗凋亡活性最强的掏亡抑制基因。它相对特异地表达于人胚胎组织以
及几乎所有人类肿瘤细胞.在正常成人组织中不表达或仅低表达;随一些癌前病变向
中起重要作用。此外,Survivin基因与肿瘤的发生、发展、侵袭与转移、放化疗敏感
性、患者生存时间及预后都有密切关系。Survivin所具有的肿瘤组织表达特异性,使
得针对survivin的肿瘤基因靶向治疗具有更好的特异性及安全性。研究表明,在不同
类型淋巴瘤与白血病细胞中存在survivin基因的过表达,并且其表达程度肿瘤细胞分
化程度、预后不良和复发等密切相关,提示Survivin基因与淋巴瘤/白血病的发生、
发展有密切关系,是针对淋巴瘤/白血病基因治疗的一个潜在靶点。
RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是近年发展起来的一种基因沉寂技术,因
其高度的序列特异性和基因沉默的高效性而成为功能基因组研究、肿瘤基因治疗、抗
病毒感染和基因药物筛选等多领域研究的重要手段。本文根据survivin基因高表达
于各类型淋巴瘤组织和淋巴瘤/自血病细胞株的特性,采用化学合成siRNA(small
interference RNA,shRNA)载体表达技术,构
RNA)法和短发夹RNA(shorthairpin
建了pSilence_rTM
淋巴瘤/白血病细胞系,观察Survivin表达沉默对淋巴瘤/白血病细胞包括细胞凋亡、
增殖和化疗药物药敏性等在内生物学特性的影响,初步探讨Survivin基因在淋巴瘤/
V
RNA干扰技术应用于淋巴瘤,白血病肿瘤基因治疗的初步研究
白血病作用机制及其在肿瘤基因靶向治疗中的意义。
全文分五部分。
一RNA干扰应用于淋巴瘤/8血病肿瘤基因研究的靶基因筛选
P21等肿瘤凋亡相关基因等在淋巴瘤,白血病组织中表达情况,探讨它们与淋巴
瘤/白血病的相关性,拟筛选出RNA干扰最适合的靶基因。
方法收集190例石蜡包埋非霍奇金淋巴瘤(NHL)组织,10例淋巴结反应性增生组
等在淋巴瘤组织和淋巴瘤/白血病细胞系的表达情况。
结果免疫组化结果显示,上述抗凋亡基因中Survivin在190NHL组织阳性表达率最
造血系统肿瘤细胞系Jurkat、Raji、Daudi细胞中呈强阳性表达;在正常人外周
血淋巴细胞不表达。
结论实验结果表明.Survivin异常表达与淋巴瘤发生、发展有密切关系,可作为评
价淋巴瘤恶性程度和临床预后的重要指标。Survivin在NHL高表达,提示干扰
其表达可产生较强的细胞生物学特性改变。是RNA干扰用于淋巴瘤/白血病肿
瘤基因研究的一个潜在靶点。
二RNA干扰Survivin基因在淋巴瘤/8血病细胞中的表达
巴瘤/白血病细胞系。
RNA干扰技术应用于淋巴I斟,白血病肿幅j占因治疗的韧步研究
方法和结果
1构建重组shRNA表达载体
4.1-CMVneoDNA,经BamHI和HindlH
从大肠杆菌DH50提取表达载体pSilencer
双酶切后,与合成的DNA模板链连接,转化大肠杆菌DH5c撇0阳性菌落;增菌培
养后提取载体DNA进行测序,结果
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