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摘 要
virus
马铃薯x病毒(potatox，Pvx)的P25蛋白是参与病毒在细胞和细胞之间运动
的一个重要蛋白，它在转录后水平的基因沉默中起到抑制作用，能够提高PVx病毒侵
染植物的成功率。本研究对植物病毒沉默抑制子P25进行原核表达、纯化并制各该抑制
子的多克隆抗体，为下一步研究抑制子在基因沉默中的分子机理奠定基础。通过体外
DNA连接酶的
DNA重组技术，将来源于pBIN61-p25质粒上的目的基因p25片段在T4
I和勋c
I酶切位点之间，构建重组
作用下，插入到原核表达载体pET-28a(+)的B鲫H
转化到大肠杆菌BL2l(DE3)，加入终浓度为1．OmM的异丙基-且一D一硫代半乳糖苷
kDa
的P25融合蛋白。该P25融合蛋白以可溶形式存在，扩大培养按1：40的比例浓缩后在
白含量达】80
比例稀释后仍可检测到0．25
ug左右的抗原(融合蛋白P25)。P25融合蛋白与其多克隆
抗体的Westem-blot经AEC化学显色后，在硝酸纤维素膜上显示出单一的特异性条带。
以上结果表明通过原核表达系统在大肠杆菌中表达出了P25融合蛋白，并且该蛋白具有
良好的抗原性和免疫原性。获得的这种植物病毒沉默抑制子P25的多克隆抗体，可以进
一步用于基因沉默机理的研究。
关键词：沉默抑制子；P25蛋白：原核表达系统
Abstract
The25kDamovement vinls of
pmtein(P25)ofpotato X(PVx)，asuppressor
call PVXtosucceedin
help i11f配ting
post仃anscri面onalgenesilencing，which plant，was
essentialforthece儿-to—cellmovementofPVXmitshost．Pmte血P25was
expressedby
beusedas for its
antigen
prokaryoticeXpressionsystem，purified加V加访，and making
irltome
the inscned
polyclo蹦觚tibodies．Thep25gene丘omplasnlidp25，啪s pET-28a(+)
vectorbetweenmesiteofB口珑HI and，铴c createa Tecombinant
I，to plasmid
thereconlbinant wasco瓶蛐cd
pET-28a(+)-p25．ThenpET-28a(+)-p25byPcR，restriction
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