视网膜神经元营养和保护体外实验研究.pdf

中文镝爱 视网膜神经元棼养和保护的体外实验研究 摘 要 磊弱 戒熬襻经元籁伤爱不能再至，因诧蘧离神经露生存畿力，键谶神经元 轴突和树突再生，及增强神经元对损伤耐受能力的研究愈来愈受到照视。临庆上谢 巍黢等疾病礤超翡税褥经损伤逶鬻绘予8族维生索治疗。邋年来靛磷究表臻，该熬 药物通过发挥它们的生化辅酶活性和，或一魑特殊功能，来维持神经系统的诞常作 爨。瞧8羧维生素怼援嚣貘褥经蒂霸建(RGCs)姻影璃来晁摄遘，藩繇穗撰揍豹 视网膜神经元的保护作用也未见报jl童。此外，最j驻的研究袭明热休克蛋白70 (HSP70)赡诱导表速霹掇离辩经元对镄伤懿穗受力，这捺暴我翻耍逡一步寻撬治 疗视网膜神经元损伤的新方法。本研究的掰的是谜实B族绦生素作为临床常规视神 经僚护裁翁俸矮，搔罨该癸蘸凌豹稳瘩度麓；褒察HSP70靛诱导张表这，及其黠 低糖和谷氨酸兴奋罐性损伤视网膜神经元和RGCs的保护作用，阐明视神经保护的 瓣途径一据嵩祷缝元怼损揍鳃醣受戆力。 方法 采鼹大鼹视网膜禅经元俸夕}疑代短辫培养技零，系缆逡理察缎生素8 弥弼保(甲旗胺)对视融膜神经元及RGCs生存及轴突再生{枣长的影响。网眭观黎 了上述维囊索对低糖弓{起静褫两膜神经元损伤豹餐}护俸孺。最螽蕊察了HSP70畿 MQIler细胞靼视网膜神经元中的表达。及HSP70对低糖和豁氨酸必裔毒性损伤的保 护棒焉。 由子抑制了非神经元翱l胞的生长，因此可以较准确地评价神经元对各种影响爨 豢静反瘦；测定缨艇活力袋霜露穗簸(MTT)遴惫法，霹籁接轰浃镪巍生存谤凌； 对低糖gl超的细胞损伤通过检测乳酸脱氢酶(LDH)的释放潼进行评价。鉴定RGCs 亵Mgllef缫疆采爨撞应缨艨将舅箍抗琢瓣舞疫翁憨{乏掌技术；黯数疆进孬合理熬统 计学处理。 建遂稽系裂磷突。曾瓷建立糕釜，i载裰鼹骥神经元、RGCs秘Mi．iller缨莲髂辨 培养体系。对B族维生素的神经营养和保护作用的研究过程分为兰个阶段，首先确 定维垒豢转羧鞋携网膜毒枣经元是黉离耱经营养童筝壤，并擐擐缨嶷滔力搜爨凝佳有教 作用浓度：然后在接种细胞的即刻用各种维生素的鼹佳有散作用浓度作用予视网麒 棒缝元，并褒不露瓣闻终止壤养，收集鳃鼹，HE染毪和RGCs的免疫缨施化学染 色，分别测蘑视网膜神经元和RGCs的轴突长度，评价维生素B旌是否有促进视网 骥裤经元秘RGCs辘突秀生停长嬲神经营莠作爝；最后，勰察褪嘲膜神经元对低糖 损伤的反成，及滚生素B族对受颟的细臌是否襻保护棒厢t藏秭，建立新生大鬣 中文摘要 表遮，并搬据细稳存活能力评价HSP70逶否能够提高视网膜神缀元对低糖和谷甄 酸兴奋毒性损伤的耐受力。 结果 视网膜神经元有聚集成簇生长的趋势。在培养的最初2d，全视网膜神 经元豹睾鑫突生长速度最块，平均约12pm／d，隧东辘突穆长停滞，蹩现一令“平台”， 第4d，又有快速伸长的趋势；与之相比，RGCs轴突再生伸长以第1d最快，其爝 速度逐灏下降，无明显“乎套”瑷象。 培菸毒有较好豹神经营养佟鼹。维生素BI、B6、B12和弥可保的最佳蠢效作用浓 度分别为100pM、100pM、1pM和1pM。 在低盘糖环境中培养6h，视嘲膜亳睾经细胞明照受损伤，表现为细胞涟力的显蓑 下降。从各种维生索的作用曲线上W见弥可保对细胞轴突伸长的键迸作用最为明显。 各葺巾维生豢对RGCs轴突伸长的作用与对照组相比，无统计学意义。而在低糖处瑷 的翮时给予8族维生素，可在不同程度上保护视网膜神经元免受低糖损伤，蒹中81、 B6和弥可保的作用较明显。 经过热休克颈处理，HSP70在MOiler细胞和税网膜神经元串离效表达，其中在 M011er细胞的表达更为持久：HSP70的诱母表达提高了视网膜神经元对低糖或兴裔 毒谯损伤蕊静细稳活力。 结论 8羧维生素瓣体癸培葬的大鬣援网貘章孛经元和RGCs奔不翳程度夔季搴 经保护和营养作用。HSP70的诱导表达能够提高视网膜神经元对低糖或兴奋毒性损 锈豹毳=}受黢力。 关键谴 援阚膜神经元；秘网膜襻缀节细腿；体外；损伤；保护 礤究生：鑫海毒(眼科学) 导 师：王