肺癌患者肿瘤区域引流淋巴结细胞体内外抗肿瘤作用实验研究.pdf

中文摘要 肺癌患者肿瘤区域引流淋巴结细胞体内外抗肿瘤作用 的实验研究 摘 要 目的：研究TDLN细胞体内外抗肿瘤作用，初步探讨 TDLN细胞的作用机理，改良TDLN细胞的培养方法，为肿 瘤特异性生物治疗提供新思路。 方法： 1肺癌患者TDLN细胞悬液的制备。 2肺癌组织单细胞悬液的制备。 3肺癌细胞抗原制备。 4 加入24孔板中(1m1／孔)，分为三组，分别加入不同的刺激物。 (500U／m1)+IL一4(1 5％C02培养箱中培养。 5TDLN细胞的异倍体检测。 6TDLN细胞的免疫表型分析：经过活化的TDLN细胞培 养1 次，用流式细胞仪分析。 入24孔板中(1 中文摘要 液一次。分别收集培养至第7、14、21天的培养上清。用ELISA 养上清中的NO的含量。 8 ， TDLN细胞的杀伤实验：经不同刺激物活化的TDLN 效应细胞培养14天后，调整细胞浓度至2×106／ml。利用乳 酸脱氢酶法检测其对自体肺癌细胞的杀伤情况。 ·9 TDLN细胞的体内抗肿瘤作用检测：采用皮下埋块法建 立荷瘤裸鼠模型，分别注射IL一2刺激的TDLN细胞、IL．2+ 刺激的TDLN细胞和单独注射IL。2。计算各组裸鼠瘤体体积， 绘制生长曲线。 10组织学检查：收集各组裸鼠的肿瘤组织，用4％多聚 甲醛固定后切片，进行免疫组化染色，显微镜下观察。 12应用流式细胞学技术检测各组裸鼠肿瘤细胞的调亡 情况以及凋亡基因相关蛋白的表达情况。 结果： 1从19肿瘤区域引流淋巴结组织中可以获得约1×108 个TDLN细胞，经14天培养后细胞数目可以增加一倍。 2经流式细胞技术分析，培养后的TDLN细胞中无异倍 体细胞存在。 中文摘要 ’ ±4．33)％，(30．87±2．25)％。 4 n师．0【的水平明显增高，有显著性差异(PO．01)。三个刺激 组分泌的NO水平无显著性差异(PO．05)。 刺激的TDLN细胞对自身肺癌细胞的特异性杀伤率分别为： tAg刺激组相比，对肺癌细胞的特异性杀伤率明显增高 (PO．05)。 6荷瘤裸鼠经不同方法治疗后肿瘤的生长情况与生理 盐水处理的对照组荷瘤裸鼠相比，从第二周开始单独使用 IL．2治疗和不同刺激剂诱导TDLN细胞治疗的荷瘤裸鼠可明 显抑制肿瘤的生长(PO．05)。从第三周开始，应用三种刺激 剂诱导TDLN细胞的治疗作用比单独使用IL．2更加明显 (PO．01)；不同诱导剂之间的抑瘤作用也存在一定的差异 细胞的抑瘤效果最强。 7经不同方法治疗后，肿瘤组织细胞的凋亡情况对荷瘤 裸鼠进行不同方法的治疗，如注射生理盐水、注射IL一2、注 3 中文摘要 治疗后肿瘤组织细胞发生了不同程度的凋亡现象，细胞的凋 ^‘ ◆ 析发现，生理盐水处理组和注射IL．2组荷瘤裸鼠的肿瘤凋亡 ， 率之间无明显差异(PO．05)，明显低于三种刺激剂诱导的 激的TDLN细胞诱导肿瘤组织的凋亡率最高(PO．01)。 。8凋亡基因相关蛋白的表达情况对荷瘤裸鼠经不同方 法治疗，如注射生理盐水、IL．2组、IL．2刺激TDLN细胞、 身tAg刺激的TDLN细胞组的肿瘤组织较注射生理盐