睫状神经营养因子对不同年龄大鼠坐骨神经再生作用及其机制.pdf

睫状神经营养因子对不同年龄大鼠 坐骨神经再生的作用及其机制 摘 要 l I周围神经受损后成功再生的条件是保护神经元可生长状态，引导再生 轴突通过损伤区，帮助轴突识别靶器官建立新突触。目前，机械修复(显微 外科手术)、雪旺细胞(SCs)的植入、电刺激及神经营养因子的应用是帮助 周围神经再生与功能恢复的主要手段。神经营养因子的应用能挽救损伤神 经元，阻止神经元变性与坏死、提高轴突再生速度，为神经再生提供有利 的微环境，从而达到神经再生和功能恢复的目的。睫状神经营养因子(CNTF) 具有多种生物活性，能减轻神经细胞损伤的发生，对损伤后的神经元特别 是运动神经元有保护作用。CNTF在中枢神经及周围神经系统中广泛存在， 合蛋白。在周围神经损伤后CNTF与其受体有其特异的变化模式及调节机 制，对神经损伤后的苒生有重要作用。 神经元能否维持正常的生理功能与神经营养因子有密切的相关性，不 同年龄阶段大鼠机体内CNTF及受体存在状况与神经损伤后表达变化的差 异可能与不同年龄大鼠周围神经损伤后神经细胞的存活率、轴突再生的速 度、靶器官的识别、新突触的建立等差异有着密切关系。 为此，l本研究以幼年、成年、老年大鼠坐骨神经离断性损伤为模型， 硅胶管连接离断神经的近、远两端为模型，分二部分进行观察研究：(～) 不同年龄大鼠坐骨神经再生中CNTF及CNTFR。的变化。采用免疫组织化 学、Western 在脊髓及坐骨神经中的分布与表达强度变化。(二)CNTF对不同年龄大鼠坐 V／PI 骨神经再生的作用。采用①TUNEL法、电镜、流式细胞仪Annexin 双标检测脊髓细胞凋亡；HE、Nissl染色、乙酰胆碱酯酶(ACHE)染色检测 脊髓神经元癌变：免疫组织化学、Westernblotting梭测脊髓Caspase3及 Bcl。xl瓣分布与表达强度变化，势进行Caspase3活链捡测；②辣擞过袋 传物酶fHRP)逆行示踪、电魏寝察聿牵经再生情拯；黪炀飘ACHE缀纯染色 检测运动终板ACHE活性；彀裁激强追运动实验、棒经转导速度搿eV)测 定检测神经再生功能恢复楱援。熬在辑究不鼹年龄大鼠瘸墨桴经再生过程 中CNTF及CNTFR。豹交佬，外滚性CNTF怼脊髓丰枣经元保护俸瘸、聿孛经 再生促进律用、秘经功能恢复俸髑，进一步搽讨神经再生在不同年龄除投 豹变纯爝律移调控特煮，为神经秀生提供邂谂铱攒。糕要结果、绪论摇下： 一、ONTF、璐ITFR。在脊髓凝坐骨聿枣经中豹分东写姨达变化 CNTF及CNTFR。免疫缎织纯学DAB染毪辫鼹性爱应产锈必抹黄色 蓝氇鬏粒，定位手跑震。Western blotting及RT．PCR梭溅髭示； 1．正常大鼠备年龄鳃脊髓、坐嚣聿孛经孛均袁CNTF、CNTFR。蛋鑫及 mRNA表达，幼年缀强予成年及老年组◇e。05)，成年终与老年缢魄较， 差异天显蔫性蠹义(PO．05)。这可毙与不嗣年龄除段慰CNTF兹需求不残 穗关。 2．本嫒究系统观察7不同年龄大鼠坐嚣耱经爵生|；建程串CNTF圾 CNTFR。虽鑫及mRNA表这交他援德，坐骨牢孛经损伤君ld、3d、1w各 年龄缀损伤侧坐嚣耪经孛CNTF爨自及mRNA表达降低，援夜瑟ld饶侧 辨经及浮髓中CNTF与CN强要。摄鑫及mRNA表达增裹，8w、12w按伤 结果表明，坐骨神经按农爱褥生过程孛太鬣坐骨穆经、脊髓CNTF及 CNTFR。蛋自及mRNA表达变纯揍琵基本一数，与祷经毳生髓鞘使静进程 密甥翅关。坐骨辛喹经攒揍螽授锈铡脊髓、坐嚣章孛经串CNTF及CNTFR。瑶 忒平状态持续辩阅隧年龄增长嚣缭短，周围耱经褥生过程辛瓣CNTF鹣褥 求Ⅺ黪存在年龄辕较{生。 3．坐劈毒孛经攫伤慝CNTFR。mRNA载增麓，提承外源牲豹给予菠好能 满是神经霉生静需求。各年龄缀在摄像后不同辩棚点CNTF缀伤侧脊髓、 坐臀神经缀织中CNTF获CNTFR。表达较生理蕴拳缰增麓P0。05‘或 O．01)，增高时阔幼年最长，成年次之，老年最短。 4．损伤轰象理盐拳缀投CNTF缝鼹铡未{筹铡脊懿、坐置毒唪经CNTF及 CNTFR。表达，除幼年伤磊12w较幼年正鬻组低於(P0。05)，其余各组与正 常缀毙较，差辩无显著性意义(PO。05)。其霹黥琢