血管新生内膜形成过程中核因子-κB和炎性基因表达变化.pdfVIP

中父摘要 中文摘要 血管新生内膜形成过程中核因子一KB 和炎性基因表达的变化 摘 要 transluminal coronary 脉粥样硬化性心脏病等心血管疾病的一种有效方法，但其远 窄的主要原因之一是血管损伤局部的炎症反应引发内膜过 度增殖。NF．心是参与炎症反应的一类重要转录因子。炎 症发生时，IKB的磷酸化降解导致NF一1(B活化入核，进而 激活下游特定炎性基因转录。研究表明，NF—KB自身的苏 氨酸磷酸化状态亦影响其转录激活活性，但未见在RS研究 中的相关报道。因此，本实验通过复制大鼠颈动脉．胸腹主 动脉内皮剥脱模型，动态观察损伤后血管壁NF．KB的表达、 核转位、苏氨酸磷酸化变化及其对下游基因表达的影响，探 讨血管再狭窄形成过程中NF一心活化与内膜增生的相互关 系及其对再狭窄的影响，为研究药物防治内膜增生性疾病奠 定基础。 方法： 1动物模型的复制及分组： 实验动物常规麻醉消毒；沿颈部正中线切口，于气管左 侧分离左侧颈总动脉、颈外动脉及颈内动脉；于颈外动脉剪 一楔形切口，球囊导管自切口处经颈总动脉插入至胸腹主动 脉远心端，充盈球囊后将其拖回到胸主动脉起始部，如此反 中文摘要 复三次；球囊减压后退回至颈总动脉近心端，再次充盈球囊， 其余操作同上；退出球囊，颈内动脉血流恢复后，关闭切口。 实验动物分为六组，分别为正常组、术后1天组、3天组、 l天组。 7天组、14天组和2 2实验标本的处理： 于上述不同时间从股动脉放血处死大鼠，分离左颈总动 脉与主动脉标本。取左颈总动脉中段血管病理切片，HE染 色观察血管壁的增生情况并进行形态学分析；分别提取胸腹 主动脉总蛋白、核蛋白及胞浆蛋白，病理切片免疫组织化学 染色和Westem blot分析检测血管壁中NF一心p65的表达变 化并检测其下游炎性基因ICAM一1和COX一2的表达变化； 通过免疫沉淀分析检测剥脱术后不同时间NF—KB p65的苏 氨酸磷酸化变化。 结果： 1内皮剥脱后血管壁中NF一1(B的表达及核转位变化： 免疫组织化学染色与Wrestemblot分析结果显示，内皮 剥脱后，血管总蛋白与核蛋白中p65的含量均明显升高，并 于术后14天达峰值，分别为对照组的4．4倍和2．15倍；术 后21天，血管总蛋白与核蛋白中p65的含量均显著下降。 blot 各组中胞浆蛋白p65含量无明显变化。11①仅的W．estem 分析结果显示，术后1天表达水平较正常对照组下降15％； 1天，基本接近正 术后3天和7天开始回升；术后14天和2 常对照组水平。 2内皮剥脱后血管壁中Ⅻ．心的苏氨酸磷酸化变化： 免疫沉淀分析结果表明，正常血管中p65保持一定的苏 氨酸磷酸化水平；内皮剥脱后1天，p65的苏氨酸磷酸化水 中文摘要 的苏氨酸磷酸化水平基本恢复至正常组水平；术后7天、14 天和21天，p65的苏氨酸磷酸化水平逐渐升高，分别较正 常组升高了30．2％、50．1％和44．4％。p65的苏氨酸磷酸化 水平与NF．KB核转位和炎性基因表达具有负相关关系。因 此，是NF—KB活性的负调控机制。 3内皮剥脱后血管壁中NF一1(B依赖的炎性基因ICAM一1、 COX．2的表达变化： 免疫组织化学染色与W．estemblot分析结果显示，正常 血管组织中仅痕量表达ICAM．1和COX．2。内皮剥脱后， 为对照组的2．77倍和3．18倍，21天时表达量均下降。 结论： 1 NF．KB p65的表达及核转位变化与血管内皮剥脱后狭窄 的发生具有一致关系。 2内皮剥脱后NF．1