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利用峰面积分析混合DNA样品 【关键词】阴道混合物，强奸，dna 【中图分类号】d919．2；q75 【文献标识码】b 【文章编号】1007～9297(2004)01—0051—03 在法医dna检验过程中，经常会遇到多个体的混合样本， 如受害人和嫌疑人的混合样品，几个嫌疑人的混合样品。荧光 标记自动分析str系统，不仅能根 据位点等位基因的个数判断 样品是否为混合样品，而且还能根据等位基因峰面积(谱带荧光 总强度)确定混合样品中各组分的混合比例，推断混合样品中各 组分的基因分型_1j。gill等建立了利用峰面积分析混合样品的 方法_2]。本文利用该法对一宗案件中的混合样品进行了分析， 推断混合样品各组分的比例及各组分的基因分型。 材料和方法 2001年于中山某地发生一宗强奸案，送检材料为事主血纱， 嫌疑人1血纱，嫌疑人2血纱，以及在嫌疑人2住处提取的一根 带毛囊的阴毛(上沾有少量分泌液)，分别编为1～4号样品。按 chelex一100法 提取dna，采用ampfi str identifiler复合扩 增试剂盒(美国abi公司)同时扩增d8sl179、d21sll、d7s820、 ( f1p0、193s1358、tho1、d13s317、d16s539、d2s1338、 d19s433、vwa、tpox、d18s51、d5s818、fga等15个位点和性 别位点amelogenin，扩增产物在abi310遗传分析仪上进行电泳 分离，genescan~3．0软件分析结果，genotypern 2．5软件进行基 因分型。 结 果 一 、样品分型 样品分型结果见表1。 表1 样品分型结果 二、结果分析 结果分析方法参照文献[2]。 (一)确定是否有混合样品 1．根据谱带数目。正常情况下进行常染色体str分型时， 纯合子应检出一条带，杂合子检出2条带，混合样品会出现谱带 数目增多。4号样品在d8sl179等3个位点检出4个等位基因 (表现为4条谱带)，在d21s11等6个位点检出3条谱带，提示 该样品为混合样品。 2．等位基因峰面积的不对称。理论上对于杂合子来说，两 个等位基因的峰面积应大致相等，比例接近于1；而混合样品由 于等位基因的叠加，可能会出现不正常的杂合子现象，两个等位 基因的峰面积差异会增大。表2列出了混合比例为1：10、1：1、 10：1时出现2个等位基因时峰面积的比例。4号样品在th01、 d13s317、tpox、d18s51、amelogene等位点均检出2条带，类似 杂合子，但2条带的峰面积明显不平衡(见表3)，同样提示4号 样本为混合样本，且为男女混合。 (二)确定混合样品中供体的数目 样品4所有位点出现的等位基因数最多为4个，提示供体数 为2个。 (三)确定混合样品中各供体的基因型组合 对于杂合子来说，两个等位基因的峰面积应大致相等，比例 接近于1。基于此原理，分析者可以通过观察到的峰面积来推断 可能的基因型组合和各组分的比例。对确定是二供体组成的混 合样本来说，分型结果可以表现为一带型、二带型、三带型或四 带型。除一带型外，其余各种表现均可提供基因型组合的信息。 其中．四带型由于直观地表现出2个供体的基因型，所以最易于 通过其推断2个供体的基因型组合及其比例。 假设某一位点出现的4个等位基因依片段由小到大的顺序 定为a、b、c、d，观察到的面积分别为paa、pab、pac、pad，定义 mx为所有位点都接近相等，然后给出一个估计的混合比例 (mx)，如果解释正确的话，观察值和期望值应接近，这对任意基 因型组合可用峰面积的剩余值eq来检验，峰面积的剩余值eq= σ(pa观察值一pa期望值) ，峰面积的剩余值越低，该基因型组 合的可能性越高。以4号样品的d8sl179位点为例，混合物中 检出10(a)、14(b)、15(c)、16(d)，据eq值可推断混合比例 (mx)bc／ad=0．62，相反混合比例(mx)ad／bc =0．38，其他的 基因型组合(如ab，cd)不可能存在，因为eq不可能接近零。 表4列出了对出现4个等位基因的位点的分析，在列出某个 位点的所有可能的基因型组合后，计算他们各自的eq值，将eq 值最小的基因型组合作为推断的基因型组合列入表4中。 取表4计算出的mx的平均值0．36，并定义mx为所有位点 都接近相等，计 [1] [2] 算各位点的eq值，见表4。 可以看出取mx的平均值后，各位点的eq值变化不大 · 52 · 分析出现3个等位基因比出现4个等位基因的模式复杂的 多，因为排列组合更多，不过可应用同样原则。除部分位点可推 断基因型并推断各组分比例，大部分出现3个等位基因的位点 只能推断各组分的多少而不能计算出具体数 值。 法律与医学杂志2004年第ll卷(第l期) 取表l计算