《中国药典》HPLC专项技能培训课件.pptVIP

《中国药典》2005年版 HPLC专项技能培训 主要内容 药典液相色谱法的调整及验证 药品杂质分析 高效液相色谱法色谱柱选择及应用 液相色谱柱的日常维护 Agilent 1200 系列液相色谱仪 第一部分：液相色谱方法的调整及验证 1、系统适用性试验 用规定的对照品对色谱系统进行试验，应符合要求。如达不到要求，可对色谱分离条件做适当的调整 不得改变：固定相种类，流动相组成，检测器类型 可改变：色谱柱尺寸，牌号，填料粒度，流动相流速，流动相各组成的比例，梯度洗脱时间长度，柱温，进样量，检测器灵敏度等 建议：注意供试品的溶剂（选择流动相或比有机含量更低的溶剂） 第一部分：液相色谱方法的调整及验证 满足系统适用性的要求 塔板数：满足个伦要求--------- 分离度：Rs＞1.5 进样精密度：2.0%----------------- 脱尾因子：0.95＜Tf＜1.05 分离时间：10~30min 定量精度：含量测定≤2.0%；痕量分析≤15% 第一部分：液相色谱方法的调整及验证 常见液相色谱参数的调整 流动相 — 改变溶剂比例：色谱柱的含碳量------ —添加剂：扫尾剂（有机胺（三乙胺、二乙胺），粒子对试剂）； 缓冲 液浓度（改变离子强度） —pH：酸含量，缓冲对的缓冲容量 固定相 — 封端柱 —pH耐受范围 —耐受高水相 柱温：升高柱温有利于增加传质速度，改善峰形和分离 进样量：在满足检测要求的前提下，尽量减少进样量----- 供试品溶剂：溶剂强度应低于流动相洗脱强度 第一部分：液相色谱方法的调整及验证 2、液相色谱方法的验证 方法验证的目的 方法验证的内容 方法验证的项目及测定方法 第一部分：液相色谱方法的调整及验证 方法验证的目的 目的：证明采用的方法适合相应检测的要求 方法验证是实验室针对待定方法的研究过程，通过设计方案，有步骤、系统地收集、处理实验数据，最终形成文件，以证明所用的方法准确、灵敏、专属并重现。同一分析方法用于不同的检测项目会有不同的验证要求。 第一部分：液相色谱方法的调整及应用 方法验证的内容 准确度 精密度 专属性 检测限 定量限 线性和范围 耐用性 第一部分：液相色谱方法的调整及验证准确度定义：方法测定结果与真实值或参考值的接近程度。（一般用回收率%表示） 1、主成份含量测定 原料药：对照品或方法比对 制剂、中药：标准加样回收 2、杂质定量 杂质对照品 方法比对 杂质与主成份的相对含量 测定：加样回收（n≥9，3×3） C－A 回收率% =———— ×100% B A：试验供试品中被测定成分的量 B：试验供试品中加入的对照品的量 C：试验测定值 一般加入量与所取供试品含量之比在 1.2：1，1.1：1，1：1，0.9：1，0.8：1 第一部分：液相色谱方法的调整及验证 精密度 定义：在规定测试条件下，同一个均匀的供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。一般用偏差，相对偏差和相对标准偏差 1.重复性（n≥9，3×3） 2.中间精密度 3.重现性 测定方法：HPLC方法的精密度测试，应从样品制备开始，设计3个浓度，分别平行制备3份，以测定含量计算相对标准偏差；或同一样品平行制备6份供试品，分别进样，以峰面积计算相对标准偏差。 第一部分：液相色谱方法的调整及验证专属性定义：在其它成分可能存在下，方法能正确测定出被测物的特征 1.鉴别反应 2.含量测定 杂质测定 限度检查 测定： 空白制剂，模拟复方 加速破坏试样测试 DAD，MSD进行峰纯度检查 第一部分：液相色谱方法的调整及验证 检测限和定量限 检测限（LOD）：供试品中被测物能被检测出的最低量。通常采用信噪比3：1或2：1 定量限（LOQ）：供试品中被测物能被定量测定的最低量。通常采用信噪比10：1 hp S ／N＝—— hbaselinenoise 测定：将一对照品储备溶液，逐步稀释，分别进样分析，计算相应色谱峰高hp 和平均基线噪音（hbaselinenoise）之比。通常报告进样质量或进样体积（需与样品制备方法相关）。 第一部分：液相色谱方法的调整及验证