第七章分子发光分析法99983.pptVIP

井冈山大学化学化工学院分析化学教研室 何德勇 第七章 分子发光分析法 molecular luminescenceanalysis 某些物质的分子吸收一定能量后，电子从基态跃迁到激发态，以光辐射的形式从激发态回到基态，这种现象称为分子发光，在此基础上建立起来的分析方法为分子发光分析法 根据分子受激时所吸收能源及辐射光的机理不同分为以下几类： 光致发光：以光能来激发而发光 电致发光：以电能来激发而发光—荧光灯 生物发光：以生物体释放的能量激发而发光 化学发光：以化学反应能激发而发光 2.电子激发态的多重度 3.激发态→基态的能量传递途径 非辐射能量传递过程 辐射能量传递过程 二、激发光谱与荧光(磷光)光谱 2.荧光光谱(或磷光光谱) 3.激发光谱与发射光谱的关系 镜像规则的解释 三、荧光的产生与分子结构的关系 2.化合物的结构与荧光 四、影响荧光强度的因素 4.内滤光作用和自吸现象 5.溶液荧光的猝灭 ——荧光物质与溶剂或其它物质之间发生化学反应，或发生碰撞后使荧光强度下降或荧光效率?f 下降称为荧光猝灭。 使荧光强度降低的物质称为荧光猝灭剂 氧分子及产生重原子效应的溴化物、碘化物等都是常见的荧光猝灭剂 碰撞猝灭—— M +?激 → M* M* + Q → M + Q +热 静态猝灭 自猝灭——荧光物质发射的荧光被荧光物质的基态分子所吸收，即自吸收现象。 一、仪器结构流程 1、光源 激发光源一般要求比吸收测量中的光源有更大的发射强度；适用波长范围宽 荧光光度计中，常使用卤钨灯作光源 荧光分光光度计中常用高压汞灯和氙弧灯 2、单色器 荧光计用滤光片作单色器，荧光计只能用于定量分析，不能获得光谱 大多数荧光光度计一般采用两个光栅单色器，有较高的分辨率，能扫描图谱，既可获得激发光谱，又可获得荧光光谱 第一单色器作用：分离出所需要的激发光，选择最佳激发波长? ex ，用此激发光激发液池内的荧光物质 ? ex 第二单色器作用：滤掉一些杂散光和杂质所发射的干扰光，用来选择测定用的荧光波长? em。 在选定的? em 下测定荧光强度，定量分析 4、检测器 把光信号转化成电信号, 放大, 直接转成荧光强度 荧光的强度一般较弱，要求检测器有较高的灵敏度，荧光光度计采用光电倍增管 荧光分析比吸收光度法具有高得多的灵敏度，是因为荧光强度与激发光强度成正比，提高激发光强度可 大大提高荧光强度 5、读出装置 记录仪记录或打印机打印出结果，扫描激发光谱和发射光谱 仪器光路图 同步扫描技术 可获得三维光谱图的仪器 激发光谱和荧光、磷光光谱 荧光和磷光均为光致发光，合适的激发光波长需根据激发光谱确定——激发光谱是在固定荧光波长下，测量荧光体的荧光强度随激发波长变化的光谱 从图中看出 ?磷＞ ?荧＞ ?激 RLS 磷光检测 二、荧光分析方法与应用 2、方法 荧光衍生法 荧光猝灭法 敏化荧光法 3、定量依据与方法 （2）定量方法 4、荧光分析法的应用 (2)生物与有机化合物的分析 1、低温磷光分析法 低温磷光分析是将试样溶于有机溶剂中，在液氮（温度77K）条件下形成刚性玻璃状物后，测量磷光.这样，可减小分子间的碰撞，防止磷光猝灭.所用的溶剂应具备下列条件： ①易于制备和提纯； ②能很好的溶解被分析物质； ③在77K温度下应有足够的粘度并能形成明净的刚性玻璃体； ④在所研究的光谱区背景要低，没有明显的光吸收和光发射现象。 低温磷光分析常用试剂 2、室温磷光分析 低温磷光需要适当的低温条件，限制了它的应用及发展.室温磷光分析避免了低温条件，将试样固定在滤纸、硅胶、氧化铝、玻璃纤维、淀粉、溴化钾等基体上，以增加其刚性，减少三重态的碰撞猝灭，增强磷光相对强度。 固体基质表面室温磷光分析 胶束稳定室温磷光分析 敏化室温磷光分析 3、室温磷光分析应用 一、基本原理 二、特点 characteristics 三、装置与技术 instrument and technology 分立取样式液相化发光仪 4.化学发光反应的类型 （1）气相化学发光反应 a. 一氧化氮与O3的发光反应 NO + O3 → NO2* NO2* → NO2 + h? 发射的光谱范围：600～875nm，灵敏度1ng/cm3； b.氧原子与SO2、NO、CO的发光反应 O3 → O2 + O （1000 ?C石英管中进行） SO2 + O + O → SO2* + O2 SO2 * → SO2*