缺血预处理和缺血后处理对大鼠肝脏热缺血再灌注损伤作用.pdfVIP

中山大母项士论太 缺血预处理和缺血后处理对大鼠肝脏热缺血再灌注损伤的作用 缺血预处理和缺血后处理对大鼠肝脏热缺 血再灌注损伤的作用 中山大学第一附属医院器官移植科 硕士研究生：叶勇 导 师：何晓顺教授 中文摘要 肝脏缺血再灌注损伤是肝移植或肝脏大手术后肝脏功能延迟恢复的主要原因 之一，并与术后许多并发症密切相关。缺血再灌注损伤是多因素参与，多种机制 共同发挥作用的，复杂的网络体系。如何预防或减轻肝脏的缺血再灌注损伤是肝 脏外科临床亟待解决的课题。缺血预处理可以通过激活腺苷受体、保护肝脏能量、 减少细胞凋亡、增强抗炎、抗氧化能力等启动内源性保护机制，能够有效减轻肝 脏的缺血再灌注损伤{缺血后处理亦可通过抑制再灌注后氧自由基的过度生成、 改善微循环等发挥保护效应。两者最根本的不同之处在于处理“时机”的差异： 预处理发生在缺血前，系通过启动组织细胞自身内源性保护机制，而使其能够耐 受随后长时间的缺血损伤；后处理面对的是已缺血组织，旨在处理和挽救缺血组 织，最大程度的减轻再灌注损伤。本实验通过利用两种处理方式来改善大鼠肝脏 的缺血再灌注损伤模型，进一步探讨两者可能的作用机制。 第一章缺血预处理及缺血后处理减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤 一、材料和方法 1．肝脏缺血再灌注模型的建立 (I／R)组：夹闭第一肝门30min后恢复血流，造成大鼠肝脏热缺血再灌注 损伤。②缺血预处理(IP)组：短暂缺血复流后建立再灌注损伤模型。③缺 血后处理(IP。)组：建立缺血再灌注模型全面复流前重复短暂的缺血再复 流过程。在各模型组建立后第3小时和12小时各处死8只大鼠，取血分离 血清后测肝酶水平，留石蜡切片，留肝脏组织制作组织匀浆测SOD、MDA 中山大擘硕士论文 缺血预处理和缺血后处理对大鼠肝脏热缺血再灌注损伤的作用 及T-AOC，留新鲜组织以提取RNA。④对照组(C)：为假手术组，10只 大鼠仅行简单分离肝十二指肠韧带，留取标本同前。 2．组织学染色和肝脏病理损害的评估 肝脏组织石蜡切片行HE染色，观察和评估肝脏组织损害程度。依据 Suzuki’S标准(肝细胞窦的缩窄程度、胞浆空泡化的程度以及肝实质细胞 的凋亡及坏死程度)，肝脏组织的病理改变分为5级：0级：末损伤；1级： 轻度损伤：2级：中度损伤；3级：损伤较重；4级：损伤严重。分别随机 Power 取肝脏病理切片20个高倍视野(×400，HighField，HPF)，通过计算 20个视野发生损害的情况对肝组织损伤进行评估。 3．统计学分析 实验数据以均值4-标准差(mean4-SD)表示，组间均数比较采用方差分析， PO．05为差异有统计学意义。 二、结果 1．肝脏功能改变 肝脏缺血再灌注造成急性肝脏损伤，损伤模型组血清转氨酶水平显著高于假 手术组[ALT：3小时，(696．5±124．5)IU／L 小时，(600．2±115．8)IU／L ±357．2)IU／L VS(696．54-124．5)IU／L， 模型组[IP组一--ALT：3小时，(356．04-83．4)IU／L AST：3小时，(970．54-250．3)IU／L 时． (800．7±143．2)IU／L ALT：3小时，(314．7±88．3)iU／L (305．8±56．8)IU／L --+245．8)IU／L IU／I。VS(1188．6±234．7)IU／L，P(0．05。』。 2．组织学改变 中山太学硕士论文 敲血预处理和缺血后处理对大鼠肝脏热缺血再灌注损伤的作用 假手术组0级：镜下可见肝组织无明显变化，肝细胞及肝窦内皮细胞均正常。 肝脏缺血再灌注模型组3～4级：肝小叶中央静脉和肝窦淤血明显，肝窦狭窄， 肝细胞出现胞浆疏松化，细胞轻度至中度水肿，出现灶性的肝细胞空泡变性，以 小叶中央区明显，汇管区有程度不等的炎性细胞浸润，部分肝细胞胞浆的嗜酸性 变较明显，并有少数肝细胞出现气球样变或脂肪变