第2章发酵液的预处理.pptVIP

第2章 预处理技术 第一节发酵液过滤特性的改变与相对纯化  三.发酵液的预处理技术方法： （重点） 1.过滤特性的改善 1.1 加热 最简单、最经济的预处理方法，加热不仅可以降低料液粘度，也可以使杂蛋白变性聚集。如链霉素发酵液 但加热变性的方法只适合于对热稳定性的产物。 1.4凝聚和絮凝技术 （2）扩散双电层的结构模型图 A.电解质可离解成正、负离子，中和电荷，静电斥力作用减弱，双电层破坏 B.电解质溶于水，多走表面水即破坏水化膜 （4）常用的凝聚剂 简单的酸或碱 Al2(SO4)3.18H2O，AlCl3.6H2O， 三氯化铁 ZnSO4，MgCl2 PS：阳离子对负电荷的胶粒凝聚能力次序为： Al3+Fe3+H+Ca2+Mg2+K+Na+Li+ （1）原理 絮凝剂为长连高分子化合物，含有多个活性功能基团（如NH2－，COOH－）等，他们通过静电引力、范德华力或H键等其它化学键，强烈地吸附在胶体粒子表面，从而使胶体粒子连接成网状结构。（－－架桥作用） （2）常用絮凝剂的种类： （3）絮凝作用的影响因素： 凝聚、絮凝与盐析的区别和联系 联系： 絮凝、凝聚和盐析都是使蛋白质等胶体从溶液中析出的方法，但其原理和方法有所不同。 区别：絮凝是指通过聚电解质的架桥作用，将溶液中的蛋白质连接起来，增大蛋白质的尺度而不是蛋白沉淀。 凝聚和盐析虽然都是采用无机盐使蛋白质沉淀，但凝聚所用的是含有高价离子的无机盐，主要是由于蛋白质与带相反电荷的高价离子发生电荷中和作用而使得蛋白质聚集沉淀，所以凝聚所需的盐浓度很低。而盐析使用的是中性盐，主要依靠盐离子的亲水性，夺走与蛋白质亲和的水而沉淀，因而盐析通常需要较高的盐浓度。 1.5加助滤剂 （1）定义： 助滤剂是一种质地坚硬、颗粒均匀，不可压缩的，具有吸附胶体能力的惰性物质。 （2）原理： 助滤剂具有吸附胶体能力，可以改变滤饼的结构（使其成网状），降低滤饼的可压缩性（可压缩变成部分可压缩），从而降低过滤的阻力，加快过滤速度。 （4）选择依据 a.根据目的物的性质－品种选择 b.根据过滤介质和过滤情况－品种选择 c.根据过滤速度及滤液澄清度－粒度选择 d.用量选择 2.相对纯化-除杂 2.1.杂蛋白的去除 （1）等电点沉淀 蛋白质在某一pH下，净电荷为零，溶解度最小，称为等电点。因为羧基的电离度比氨基大，故蛋白质的酸性性质通常强于碱性，因而很多蛋白质的等电点都在酸性范围内（pH 4.0－5.5）。 ①加热：在链霉素生产中，在pH3.0时，加热至70～75℃，维持30min，黏度降为1/6，过滤速度提高3倍。 ②加有机溶剂、表面活性剂、酸碱、重金属等。 如：在酸性溶液中，蛋白质能与一些阴离子如三氯乙酸盐、水杨酸盐、钨酸盐、苦味酸盐、鞣酸盐、过氯酸盐等形成沉淀； 如：在碱性溶液中，能与一些阳离子，如Ag＋，Cu2＋，Zn2＋，Fe2＋和Pb2＋等形成沉淀。 变性蛋白质溶解度较小。最常用的使蛋白质变性的方法是加热。加热还能使液体粘度降低，加快过滤速度。该法只适用于对热较稳定的生化物质。 （3）吸附 在发酵液中加入一些反应剂，相互反应后生成的沉淀物可吸附蛋白质而使其沉淀。如在四环素发酵液中加入黄血盐和硫酸锌，两者反应生成K2Zn3[Fe(CN)6]2 在枯草杆菌的碱性蛋白酶发酵液中加入氯化钙和磷酸盐等 （4）盐析 2.2 不溶性多糖的去除 当发酵液中含有较多不溶性多糖时，黏度增大，固液分离困难，可用酶将其转化为单糖。 2.3 高价无机离子的去除 发酵液中杂质很多，其中对提炼影响最大的是高价无机离子（Ca2＋、Mg2＋、Fe2＋）等。 高价无机离子的存在，会影响树脂对生化物质的交换容量。杂蛋白质的存在，不仅在采用离子交换法和大网格树脂吸附法提炼时会降低其吸附能力，而且在采用有机溶剂或两水相萃取时，容易产生乳化，使两相分离不清，在预处理时，应尽量除去这些物质。 除去Ca2＋——草酸钠 Mg2＋ ——草酸根（草酸镁溶解度稍大）或磷酸盐 Fe2＋ ——黄血盐（生成普鲁士兰沉淀） 1 细胞壁的组成和破碎阻力 2 细胞壁的结构 2.1.1革兰氏阳性菌a.15－50层肽聚糖片层b.壁磷壁酸和膜磷壁酸 2.1.2革兰氏阴性菌 a.1－2层肽聚糖片层b.脂蛋白（将外膜固定于肽聚糖层）、脂质双层及脂多糖（稳定细胞结构） 各种微生物细胞壁的结构与组成 三.细胞破碎率的计算 四. 微生物细胞的破碎技术 1细胞破碎机理图 1.1高压匀浆法 高压匀浆器 1.2 珠磨法 原理：在膜腔中装入小玻璃球或小钢球，在搅拌浆的作用下，它将使细胞悬浮液与细胞悬浮液，细胞悬浮液与玻璃小珠、石英砂或氧化铝一起发生碰撞、剪切，使细胞在某种程度上破碎，再由液珠分离器分开、排出。（