实验动物常见支原体特异性抗原初步研究.pdf

巾闰协和仄科人学坝J学位论史 实验动物常见支原体 特异性抗原的初步研究 学生： 刘英 导师： 李红 ＼ 摘 要 t j／ ＼肺支原体、溶神经支原体和关节炎支原体是啮齿类实验动物的主 要致病菌，并成为清洁级动物以上的常见污染菌。支原体感染的实验 室检测方法中常用的有分离培养法、血清学和分子生物学诊断法。支 原体在分离培养时生长缓慢、营养及培养条件要求较高；以PCR为代 表的分子生物学检测方法快速、敏感，但特异性尚有待提高。目前使 用的以间接免疫荧光法(IFA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)为主的 血清学检测方法，通常是以支原体的全菌蛋白为诊断抗原，而支原体 蛋白抗原成分复杂，易出现与血清中其它与之有相似抗原决定簇病原 菌抗体的交叉反应。因此，提高诊断抗原特异性，将是解决血清学诊 断方法特异性的关键。卜 本研究首先使用SDS—PAGE对12株分离自我国南北不同地域的啮 齿类实验动物易感支原体，以及肺支原体(Mp)、关节炎支原体(Ma) 和溶神经支原体(Mn)标准株进行了蛋白图谱分析，确定了这三种支 原体的主要蛋白条带。肺支原体蛋白主带分子量大约分别是相对分子 蛋白主带主要分布于相对分子质量(66、40、35、28、14)×103。 12个分离株及其标准株与相应的免疫血清进行免疫印迹试验结果 中周协和仄科人学坝Ij学位论义 X 显示：支原体属的特异性抗原相对分子质量为62N68×10。和27～33 10’： 103。肺支原体的种特异性抗原相对分子质量为(23、40、46、68)X 溶神经支原体的种特异性抗原相对分子质量为(30、32、37、43、68) ×103；关节炎支原体的特异性抗原为相对分子质量(28、40、50、66、 体和关节炎支原体除了属共同抗原以外的共同抗原成分，溶神经支原 体与前两者间仅有较弱的抗原抗体反应。3种支原体的抗血清与实验 动物常见病原菌有不同的交叉条带，这在选择特异性抗原作为血清学 方法诊断抗原时应予以注意。本研究还将SDS．PAGE和免疫印迹结果 相结合，对不同来源的分离株进行了种的鉴定和种内分型。 一、f经过对来自不同地域的啮齿类实验动物易感支原体的全细胞蛋白 图谱和可溶性抗原成分的分析，并与参考株比较，我们建立了支原体 属和种的特异抗原图谱和蛋白图谱，为支原体的鉴定和分型提供了新 的、更快捷、更准确的方法；我们所指出的特异性抗原，也为精致血 清学方法的诊断抗原氐进一步研制基因工程抗原以及制备支原体单克 隆抗体提供了理论依据∑＼ 关键词：支原体特异性抗原蛋白实验动物 !：里坐塑堕塑叁兰塑l：兰些丝墨—————————————一 of Antigen Specific Analysis Primary of in Animals Laboratory Mycoplasmas StudentLiu Ying Li Hong Supervisor Abstract